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免疫磁珠分離法純化抗血清的實(shí)驗(yàn)條件,并與A蛋白親和層析法比較純化效果,以求得到一種簡便,快速,高效的純化IgG方法.結(jié)果表明:從5只新西蘭兔獲得210 mL試管凝集效價(jià)高達(dá)1:5 120的兔抗鰻弧菌抗血清,磁珠與IgG結(jié)合10 min達(dá)到平衡,其比較大結(jié)合量為0.227 mg/mL;免疫磁珠分離法與A蛋白親和層析法得到的IgG純度都很高,經(jīng)過SDS-PAGE電泳都只得到25 ku和55 ku左右的兩條帶;免疫磁珠分離法得到的抗體ELISA效價(jià)高于A蛋白親和層析法;免疫磁珠分離法反應(yīng)所需時(shí)間(10 min)小于A蛋白親和層析法所需的20 min,其得率(11.5 mg/mL)也高于A蛋白親和層析法的10.25 mg/mL.BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。遼寧anti-Myc COIP免疫磁珠市場報(bào)價(jià)
產(chǎn)品價(jià)格
產(chǎn)品貨號
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規(guī)格
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價(jià)格
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Beenbio -PR002-0.4
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0.4 mL
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1150 RMB
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Beenbio -PR002-1
|
1 mL
|
1780 RMB
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Beenbio -PR002-5
|
5 mL
|
6825 RMB
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產(chǎn)品描述
BEENbio Anti Flag COIP磁珠在大小為1um的納米磁珠上供價(jià)結(jié)合了大量的小鼠Anti Flag單克隆抗體,與傳統(tǒng)的Anti Flag COIP瓊脂糖凝膠比較,抗體結(jié)合能力相同,背景更低,由于采用磁性分離,使得每次COIP可以節(jié)省40%的時(shí)間。
產(chǎn)品特性
項(xiàng)目
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特性
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抗體亞型
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鼠源IgG1
|
抗體純化方法
|
Protein A 純化制備
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適用范圍
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免疫共沉淀(IP),Flag tag蛋白純化
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推薦使用體積
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COIP: 500μl 細(xì)胞裂解液 使用 10μL磁珠
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融合蛋白結(jié)合容量
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大于1.1 mg Flag tagged protein/mL 磁珠
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儲存條件
4oC長期穩(wěn)定,
使用說明
磁珠的準(zhǔn)備
重懸Anti Flag 免疫磁珠,取10 μL加入到500 μL TBS,洗滌3次,分離磁珠,棄上清。
樣品的結(jié)合(binding)
在上述沉淀中加入500 μL細(xì)胞裂解液,室溫緩慢孵育2小時(shí)或者4°C條件下過夜,分離磁珠,棄上清。
結(jié)合過程中,磁珠可能會出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀,屬于正?,F(xiàn)象,不會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
洗滌(washing):0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次,每次5min,分離磁珠,棄上清。
洗脫(elution):上述所得沉淀中加 入50 μL 1×蛋白上樣緩沖液,煮沸5 min,冷卻后分離磁珠,吸取上清液,進(jìn)行SDS-PAGE檢測。 吉林anti-HA COIP免疫磁珠性能抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠的制備及初步應(yīng)用。
免疫共沉淀檢測(CO-IP)
BEENbio提供免疫共沉淀(CO-IP)檢測服務(wù)。可對兩種已知蛋白是否存在相互作用進(jìn)行驗(yàn)證,也可以驗(yàn)證在總蛋白中是否含有與已知蛋白相互作用的未知蛋白。其實(shí)驗(yàn)方法為將靶蛋白(X)與目的蛋白(Y)在同一細(xì)胞內(nèi)孵育,形成“靶蛋白-目的蛋白”復(fù)合物。將靶蛋白的特異性抗體與復(fù)合物共孵育,形成“抗體-靶蛋白-目的蛋白”復(fù)合物,利用Proterin A/G純化。通過SDS-PAGE銀染,結(jié)合Western Blot及液相質(zhì)譜等對兩種蛋白之間是否存在相互作用進(jìn)行定性分析。
服務(wù)優(yōu)勢
? 使用銀染技術(shù),靈敏度是考馬斯亮藍(lán)100倍,SDS-PAGE電泳結(jié)果更加清晰;
? 擁有液相質(zhì)譜及Fortebio等完整配套檢測設(shè)備,可對檢測結(jié)果進(jìn)一步分析;
? 實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行兩次,排除隨機(jī)因素影響,結(jié)果更加可靠;
? 擁有蛋白、抗體等制備平臺,您只需提供序列便可完成全部實(shí)驗(yàn);
產(chǎn)品價(jià)格
產(chǎn)品貨號
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規(guī)格
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價(jià)格
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BEENbio-PR004-0.4
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0.4 mL
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1150 RMB
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BEENbio -PR004-1
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1 mL
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1780 RMB
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BEENbio -PR004-5
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5 mL
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6825 RMB
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產(chǎn)品描述
BEENbio Anti Myc COIP磁珠在大小為2um的納米磁珠上供價(jià)結(jié)合了大量的小鼠Anti Myc 單克隆抗體,與傳統(tǒng)的Anti Myc COIP瓊脂糖凝膠比較,抗體結(jié)合能力相同,背景更低,由于采用磁性分離,使得每次COIP可以節(jié)省40%的時(shí)間。
產(chǎn)品特性
項(xiàng)目
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特性
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抗體亞型
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鼠源IgG1
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抗體純化方法
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Protein A 純化制備
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適用范圍
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免疫共沉淀(IP),Myc tag蛋白純化
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推薦使用體積
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COIP: 500μl 細(xì)胞裂解液 使用 10μL磁珠
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融合蛋白結(jié)合容量
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大于1.1 mg Myc tagged protein/mL 磁珠
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儲存條件
4oC長期穩(wěn)定
使用說明
磁珠的準(zhǔn)備
重懸Anti Myc 免疫磁珠,取10 μL加入到500 μL TBS,洗滌3次,分離磁珠,棄上清。
樣品的結(jié)合(binding)
在上述沉淀中加入500 μL細(xì)胞裂解液,室溫緩慢孵育2小時(shí)或者4°C條件下過夜,分離磁珠,棄上清。
注意:結(jié)合過程中,磁珠可能會出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀,屬于正?,F(xiàn)象,不會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
洗滌(washing):0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次,每次5min,分離磁珠,棄上清。
洗脫(elution):上述所得沉淀中加 入50 μL 1×蛋白上樣緩沖液,煮沸5 min,冷卻后分離磁珠,吸取上清液,進(jìn)行SDS-PAGE檢測。
BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠 Cell Nature Science。
免疫磁珠(Immunomagneticbeads,IMB),是由載體微球和免疫配基結(jié)合而成的一種納米級材料.免疫磁珠分離技術(shù)是以高均一性的磁性微球?yàn)楣滔嘀С治?將免疫配基(如抗體,抗原等)通過功能基團(tuán)結(jié)合到磁性載體上形成免疫磁性微球,利用特異性的免疫學(xué)反應(yīng),在磁力作用下,發(fā)生力學(xué)移動(dòng),從混合溶液中分離出特異性的靶物質(zhì).具有分離速度快,效率高,可重復(fù)性好,操作簡單,不需要昂貴的儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn).本實(shí)驗(yàn)采用化學(xué)共沉淀的方法合成了納米級Fe3O4磁性微粒,具有顆粒均一程度高,懸浮穩(wěn)定性好,超順磁性等特點(diǎn),經(jīng)固體物含量的測定及其粒徑的測定,磁珠的濃度約為7.9mg/mL,粒徑約為30~100nm左右,對其懸浮液加入烷基化試劑和醛基化試劑進(jìn)行表面修飾,提高了磁性微粒的性能.免疫磁珠陰性法富集惡性胸腔積液中腫瘤細(xì)胞方法的建立。江蘇anti-Myc COIP免疫磁珠代理價(jià)格4折起
免疫磁珠捕獲法分離抗酸桿菌的實(shí)驗(yàn)研究。遼寧anti-Myc COIP免疫磁珠市場報(bào)價(jià)
常見問題及對策
5: 磁珠在使用過程中出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象?
磁珠在使用時(shí)如果出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散,容易導(dǎo)致分 布不均,出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的 結(jié)合在一起。用超聲波水浴處理 2min 即可打散磁珠使其重新分散, 但應(yīng)注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落,所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。
緩沖液匯總
Co-IP & CHIP磁珠緩沖液匯總:
細(xì)胞裂解液:正常RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液(一般是公司購買)
抗體磁珠結(jié)合buffer:PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)
Washing buffer: PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)
抗原與抗體/磁珠復(fù)合物binding buffer:可以用RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液代替
Washing buffer: PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)
6、Elution buffer: (1)變性洗脫緩沖液,直接加入1*蛋白loading buffer, 98oC 5 min后棄去磁珠后,收集上清液檢測。(2)非變性洗脫緩沖液:Elution buffer: 0.1 M -0.2 M Glycine, 0.1%-0.5% Triton 100 or Tween 20, pH 2.5-3.1。
遼寧anti-Myc COIP免疫磁珠市場報(bào)價(jià)
上海普平生物科技有限公司主要經(jīng)營范圍是化工,擁有一支專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和良好的市場口碑。公司業(yè)務(wù)分為科研試劑、耗材、儀器,納米脂質(zhì)體,細(xì)胞、分子、蛋白實(shí)驗(yàn),科研項(xiàng)目等,目前不斷進(jìn)行創(chuàng)新和服務(wù)改進(jìn),為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司秉持誠信為本的經(jīng)營理念,在化工深耕多年,以技術(shù)為先導(dǎo),以自主產(chǎn)品為重點(diǎn),發(fā)揮人才優(yōu)勢,打造化工良好品牌。普平生物立足于全國市場,依托強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力,融合前沿的技術(shù)理念,飛快響應(yīng)客戶的變化需求。