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陜西anti-Myc COIP免疫磁珠批量定制

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-03-06

兔前軟骨干細(xì)胞PSCs,(precartilagiousstemcells)的分離,培養(yǎng)方法及增殖,表型特征,為細(xì)胞移植***椎間盤退變,提供合適的種子細(xì)胞.[方法]取胎兔骨骺周圍軟骨膜(LaCroix環(huán))中的細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),然后采用免疫磁珠分離系統(tǒng)分選純化PSCs.體外培養(yǎng),傳代,凍存復(fù)蘇,繪制生長曲線,觀察細(xì)胞特性.分別采用免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定純化后的PSCs.[結(jié)果]免疫磁珠分離可獲得純度較高的兔PSCs,培養(yǎng)后成活率高,細(xì)胞狀態(tài)良好.細(xì)胞凍存復(fù)蘇后,細(xì)胞增殖速度,細(xì)胞形態(tài)及表面標(biāo)志物無明顯變化.免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定后,細(xì)胞都有明顯的PSCs表面特異性標(biāo)記物的表達(dá).[結(jié)論]PSCs存在于LaCroix環(huán)中,免疫磁珠分離法得到的PSCs,體外培養(yǎng)條件下,細(xì)胞增殖較快,生物學(xué)特性穩(wěn)定.免疫磁珠分選兔前軟骨干細(xì)胞及細(xì)胞研究平臺(tái)的建立。陜西anti-Myc COIP免疫磁珠批量定制

免疫磁珠(Immunomagneticbeads,IMB),是由載體微球和免疫配基結(jié)合而成的一種納米級(jí)材料.免疫磁珠分離技術(shù)是以高均一性的磁性微球?yàn)楣滔嘀С治?將免疫配基(如抗體,抗原等)通過功能基團(tuán)結(jié)合到磁性載體上形成免疫磁性微球,利用特異性的免疫學(xué)反應(yīng),在磁力作用下,發(fā)生力學(xué)移動(dòng),從混合溶液中分離出特異性的靶物質(zhì).具有分離速度快,效率高,可重復(fù)性好,操作簡單,不需要昂貴的儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn).本實(shí)驗(yàn)采用化學(xué)共沉淀的方法合成了納米級(jí)Fe3O4磁性微粒,具有顆粒均一程度高,懸浮穩(wěn)定性好,超順磁性等特點(diǎn),經(jīng)固體物含量的測定及其粒徑的測定,磁珠的濃度約為7.9mg/mL,粒徑約為30~100nm左右,對(duì)其懸浮液加入烷基化試劑和醛基化試劑進(jìn)行表面修飾,提高了磁性微粒的性能.江蘇anti-Flag COIP免疫磁珠批量定制免疫磁珠純化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立。

BEENbio鏈霉親和素磁珠本產(chǎn)品是由磁性納米顆粒與高純度的鏈霉親和素共價(jià)偶聯(lián)而成。這種微球能用于捕獲生物素標(biāo)記的底物,如抗原、抗體和核酸等。鏈霉親和素(streptavidin)與生物素(biotin)的結(jié)合是***的非共價(jià)生物交互作用之一,因此,這也是親和層析法所使用的一種強(qiáng)大工具。生物分子可以與生物素輕松融合,而層析基質(zhì)上固定的鏈霉親和素配體可以與之結(jié)合,而且這種鏈霉親和素-生物素相互作用具有較低的非特異親和性,捕獲所需的底物能夠直接應(yīng)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)檢測、核酸純化、核酸固相雜交檢測、細(xì)胞分選等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

COIP 磁珠緩沖液匯總

細(xì)胞裂解液
正常RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液(一般是公司購買)
結(jié)合緩沖液binding buffer
用RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液代替
洗滌緩沖液Washing buffer
PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)
洗脫緩沖液Elution buffer
直接加入1*蛋白loading buffer, 98oC 5 min后棄去磁珠后,收集上清液檢測。

COIP 常見問題及對(duì)策


BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠全國招商代理。

常見問題
原因
解決方法
高的背景條帶
蛋白非特異結(jié)合到抗體,磁珠或EP管上洗滌次數(shù)不夠
對(duì)裂解液進(jìn)行預(yù)處理去除非特異蛋白; 在***一次洗滌前, 轉(zhuǎn)移整個(gè)樣品到新的EP管中然后進(jìn)行離心。
洗滌次數(shù)不夠
增加洗滌的時(shí)間和次數(shù)。
無蛋白條帶
Myc 標(biāo)簽蛋白沒有表達(dá)
確保目的蛋白帶有Flag/HA/Myc 標(biāo)簽; 制備新鮮的裂解液; 使用恰當(dāng)?shù)牡鞍酌敢种苿?/span>
孵育時(shí)間不足
增加孵育時(shí)間。
樣品中存在干擾物質(zhì)
裂解液中存在高濃度的DTT,2-mercaptoetMyc nol或者其他的還原劑;

實(shí)驗(yàn)優(yōu)化建立基于免疫磁分離技術(shù)對(duì)金黃色葡萄球菌的快速分離方法,為后續(xù)快速檢測提供基礎(chǔ).利用金黃色葡萄球菌多抗制備的免疫磁珠對(duì)其捕獲.結(jié)合平板菌落計(jì)數(shù),考察包被磁珠時(shí)多抗加入量,免疫磁珠加入量及捕獲時(shí)間等因素對(duì)捕獲效率的影響.在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),并對(duì)該方法的靈敏度,特異性及其在食品中的應(yīng)用效果初步探索.結(jié)果表明,比較好捕獲條件為抗體加入量30μL,免疫磁珠加入量80μL,捕獲時(shí)間45min,在此條件下捕獲效率均超過30%,該方法捕獲限可達(dá)到101CFU/mL,特異性良好,并初步用于羊肉卷洗水中金黃色葡萄球菌的快速分離,捕獲時(shí)間小于1h.免疫磁分離作為一種快速的分離篩選方法,可用于食源性金黃色葡萄球菌的快速分離.BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠全國招商代理。上海protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠代理價(jià)格4折起

CD3/CD28免疫磁珠法體外擴(kuò)增外周血T淋巴細(xì)胞。陜西anti-Myc COIP免疫磁珠批量定制

免疫磁珠細(xì)胞分選方法可以在幾分鐘內(nèi)從復(fù)雜的細(xì)胞混合物中分離出很高純度的細(xì)胞。把細(xì)胞用超級(jí)順磁性的免疫磁珠特異性地標(biāo)記,磁性標(biāo)記完后,把這些細(xì)胞通過一個(gè)放在強(qiáng)而穩(wěn)定磁場中的分選柱。分選柱里的基質(zhì)造成一個(gè)高梯度磁場。被磁性標(biāo)記的細(xì)胞滯留在柱里而未被標(biāo)記的細(xì)胞則流出。當(dāng)分選柱移出磁場后,滯留柱內(nèi)的磁性標(biāo)記細(xì)胞就可以被洗脫出來,這樣就完全可以獲得標(biāo)記和未標(biāo)記的兩個(gè)細(xì)胞組份。超順磁性的磁珠的體積很小,其直徑約為50nm,體積約小于真核細(xì)胞的一百萬份之一,可與病毒的大小相比。標(biāo)記細(xì)胞上的微型磁珠即使在掃描電鏡照片上也幾乎看不到。磁性抗體和磁性標(biāo)記物間的反應(yīng)可在幾分鐘內(nèi)完成。由于微型磁珠的體積極小,所以不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性壓力,而且使孵育時(shí)間短,操作過程快。免疫磁珠形成一個(gè)穩(wěn)定的膠體液,它們在磁場中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的組成成份(氧化鐵和多糖)使其可被生物降解,且不會(huì)***細(xì)胞或影響細(xì)胞的功能和活力,細(xì)胞的生理功能也不變。磁珠不需要去除,因此,陽性分選出的細(xì)胞(即磁性標(biāo)記細(xì)胞)可立即用于分析和隨后的實(shí)驗(yàn)。陜西anti-Myc COIP免疫磁珠批量定制

上海普平生物科技有限公司致力于化工,以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)***管理的追求。普平生物作為上海普平生物科技有限公司上海普平生物科技有限公司上海普平生物科技有限公司從事生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓;實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、化工原料及產(chǎn)品的銷售;計(jì)算機(jī)軟件開發(fā);計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)工程;從事貨物及技術(shù)進(jìn)出口業(yè)務(wù)。 的企業(yè)之一,為客戶提供良好的科研試劑、耗材、儀器,納米脂質(zhì)體,細(xì)胞、分子、蛋白實(shí)驗(yàn),科研項(xiàng)目。普平生物致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對(duì)用戶產(chǎn)品上的貼心,為用戶帶來良好體驗(yàn)。普平生物始終關(guān)注化工行業(yè)。滿足市場需求,提高產(chǎn)品價(jià)值,是我們前行的力量。

標(biāo)簽: 免疫磁珠