從臍血中分離,培養(yǎng)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞,研究?jī)?nèi)皮祖細(xì)胞的生長(zhǎng)特性和誘導(dǎo)分化條件.方法:應(yīng)用MACS磁球抗體標(biāo)記法純化臍血中的CD133+細(xì)胞,通過流式細(xì)胞儀,免疫細(xì)胞化學(xué),免疫熒光等技術(shù)及形態(tài)學(xué)(光鏡,電鏡)觀察研究?jī)?nèi)皮祖細(xì)胞;將細(xì)胞接種于添加(或未添加)VEGF,bFGF,干細(xì)胞因子(SCF)的含20%胎牛血清(FBS)的IMDM培養(yǎng)基中,觀察內(nèi)皮祖細(xì)胞的生長(zhǎng)特性.結(jié)果:分離新鮮臍血所得CD133陽性細(xì)胞占單個(gè)核細(xì)胞的(1.41±1.14)%,經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定CD133+細(xì)胞純度為75%-85%;將分離細(xì)胞接種于纖維連接蛋白包被的24孔板內(nèi),培養(yǎng)1-2h即有細(xì)胞貼壁,7-10d可見貼壁細(xì)胞呈鋪路石樣排列;14d后細(xì)胞出現(xiàn)小圓形,梭形等多樣性變化,可見***管腔樣結(jié)構(gòu),電鏡觀察可見胞漿內(nèi)典型的Weibel-Palade小體;在VEGF,bFGF,SCF存在條件下,檢測(cè)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)14d后細(xì)胞表面抗原表達(dá)情況:與培養(yǎng)開始時(shí)相比,祖細(xì)胞標(biāo)志CD133和CD34陽性率呈明顯下降趨勢(shì),分別由(77.0±3.3)%和(93.1±4.7)%降至(1.6±2.2)%和(37.4±4.9)%,P<0.05,內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志Flk-1表達(dá)明顯增加,由(22.3±3.3)%增至(94.3±4.1)%,P<0.05,同時(shí)vWF抗原呈強(qiáng)陽性表達(dá),陽性率為(77.9±3.3)%.BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。浙江protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細(xì)胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細(xì)胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個(gè)核細(xì)胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細(xì)胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負(fù)分選,錐蟲藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)MACS分選前后細(xì)胞活力.流式細(xì)胞儀鑒定分選后細(xì)胞純度;流式細(xì)胞儀分析培養(yǎng)細(xì)胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達(dá)情況.結(jié)果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細(xì)胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細(xì)胞生長(zhǎng)良好,**長(zhǎng)傳代到第20代.分選前后細(xì)胞活力分別為(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,無明顯差異;流式細(xì)胞儀分析獲取的CD45-,GlyA-細(xì)胞純度大于98%;流式細(xì)胞儀檢測(cè)hMAPCs中CD29陽性表達(dá)細(xì)胞比率為99.2%,CD44陽性細(xì)胞比率為98.3%,CD34陽性細(xì)胞比率為1.2%,HLA-DR陽性細(xì)胞比率為5.3%.結(jié)論:CD45,GlyA免疫微磁珠負(fù)分選可從骨髓中分離高純度的hMAPCs;分選后hMAPCs在自行研制的培養(yǎng)基中有較強(qiáng)的增殖能力.上海protein A/G COIP免疫磁珠供應(yīng)商用免疫磁珠法檢測(cè)抗白念珠*烯醇化酶抗體。

應(yīng)用免疫磁珠法分離篩選人乳牙牙髓干細(xì)胞,并做培養(yǎng)鑒定.方法采用STRO-1為標(biāo)記物以免疫磁珠分離篩選人乳牙牙髓干細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型,并檢測(cè)細(xì)胞體外多向分化能力.結(jié)果應(yīng)用免疫磁珠法篩選人乳牙牙髓細(xì)胞可獲得乳牙牙髓干細(xì)胞,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理證明看其生長(zhǎng)速度慢于牙髓細(xì)胞,細(xì)胞表型分析證實(shí)CD29,CD105高表達(dá),CD34,CD45低表達(dá).礦化誘導(dǎo)和成脂誘導(dǎo)證實(shí)STRO-1+乳牙牙髓細(xì)胞具有干細(xì)胞多向分化的能力.結(jié)論免疫磁珠法是有效的分離純化人乳牙牙髓干細(xì)胞的方法.所分離的細(xì)胞具有干細(xì)胞的表型特點(diǎn)及多向分化能力.

免疫磁珠分離羊水來源OCT-4陽性胎兒干細(xì)胞的可行性.方法 采用免疫磁珠細(xì)胞分選法去除羊水細(xì)胞中CD44和SSEA4陽性細(xì)胞,使OCT-4陽性胎兒干細(xì)胞間接得到分離,體外培養(yǎng)擴(kuò)增后,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)特性,免疫熒光染色計(jì)算OCT-4陽性胎兒干細(xì)胞得率,Real-TimePCR比較分離前后OCT-4表達(dá)量的差異,免疫組化檢測(cè)NANOG,AKP,MAP-2,NGFR和Myosin等細(xì)胞因子的表達(dá).結(jié)果 經(jīng)免疫磁珠分離的細(xì)胞接種12h內(nèi)貼壁生長(zhǎng),形態(tài)呈梭形,部分呈多角形,融合后形成輻射狀排列.免疫熒光染色OCT-4陽性細(xì)胞得率為(90.15±8.25)%,Real-TimePCR檢測(cè)結(jié)果顯示分離后細(xì)胞OCT-4的表達(dá)量較未分離細(xì)胞和MSC有***性差異(P<0.01).原代培養(yǎng)可獲得(1～2)×107個(gè)細(xì)胞,3代可獲得(2～4)×108個(gè)細(xì)胞,傳至10代以后細(xì)胞的增殖能力下降.免疫組化結(jié)果顯示OCT-4陽性胎兒干細(xì)胞表達(dá)NANOG,AKP,MAP-2和NGFR等細(xì)胞因子.結(jié)論 免疫磁珠細(xì)胞分選法可以從羊水中分離出OCT-4陽性的胎兒干細(xì)胞,分離后的細(xì)胞保持干細(xì)胞原有特性及生物學(xué)特征,可作為組織工程種子細(xì)胞.應(yīng)用免疫磁珠分離法純化弓形蟲速殖子的研究。

常見問題及對(duì)策

5： 磁珠在使用過程中出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象？

磁珠在使用時(shí)如果出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散，容易導(dǎo)致分 布不均，出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場(chǎng)中放置太久而使磁珠牢固的 結(jié)合在一起。用超聲波水浴處理 2min 即可打散磁珠使其重新分散， 但應(yīng)注意超聲處理也會(huì)使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。

緩沖液匯總

Co-IP & CHIP磁珠緩沖液匯總：

細(xì)胞裂解液：正常RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液(一般是公司購(gòu)買)

抗體磁珠結(jié)合buffer：PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

Washing buffer: PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

抗原與抗體/磁珠復(fù)合物binding buffer：可以用RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液代替

Washing buffer: PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

6、Elution buffer: (1)變性洗脫緩沖液，直接加入1*蛋白loading buffer, 98^oC 5 min后棄去磁珠后，收集上清液檢測(cè)。（2）非變性洗脫緩沖液：Elution buffer: 0.1 M -0.2 M Glycine, 0.1%-0.5% Triton 100 or Tween 20, pH 2.5-3.1。

應(yīng)用免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1陽性細(xì)胞。浙江protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)方法在羧基磁珠表面偶聯(lián)抗體,制備可高效分離細(xì)胞的免疫磁珠.方法用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再與抗體上氨基進(jìn)行反應(yīng),從而將抗體偶聯(lián)于磁珠表面,獲得免疫磁珠.使用高性能納米粒度分析儀(HPPS),二辛可酸(BCA)蛋白定量試劑盒,流式細(xì)胞儀,透射電鏡(TEM)表征磁珠的粒徑,磁珠表面聯(lián)接的抗體量及其免疫活性.結(jié)果HPPS檢測(cè)磁珠平均水力學(xué)粒徑為110nm;磁珠表面偶聯(lián)52.4μg抗CD11a+抗體/mg磁珠.經(jīng)磁分離后細(xì)胞的流式分析結(jié)果表明,CD11a+免疫磁珠可以有效分離髓系白血病細(xì)胞系(KG-1a)細(xì)胞,免疫磁珠均勻結(jié)合于細(xì)胞表面,且不影響細(xì)胞的活性.結(jié)論成功制備可用于細(xì)胞分離且不影響分離后細(xì)胞活性的新型免疫磁珠.浙江protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

上海普平生物科技有限公司是一家上海普平生物科技有限公司上海普平生物科技有限公司上海普平生物科技有限公司從事生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓；實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、化工原料及產(chǎn)品的銷售；計(jì)算機(jī)軟件開發(fā)；計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)工程；從事貨物及技術(shù)進(jìn)出口業(yè)務(wù)。 的公司，是一家集研發(fā)、設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司。公司自創(chuàng)立以來，投身于科研試劑、耗材、儀器，納米脂質(zhì)體，細(xì)胞、分子、蛋白實(shí)驗(yàn)，科研項(xiàng)目，是化工的主力軍。普平生物不斷開拓創(chuàng)新，追求出色，以技術(shù)為先導(dǎo)，以產(chǎn)品為平臺(tái)，以應(yīng)用為重點(diǎn)，以服務(wù)為保證，不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值，提供更優(yōu)服務(wù)。普平生物始終關(guān)注化工行業(yè)。滿足市場(chǎng)需求，提高產(chǎn)品價(jià)值，是我們前行的力量。