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上海protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠銷售

來源: 發(fā)布時間:2022-02-28
COIP 磁珠緩沖液匯總

細胞裂解液
正常RIPA 細胞裂解緩沖液(一般是公司購買)
結合緩沖液binding buffer
用RIPA 細胞裂解緩沖液代替
洗滌緩沖液Washing buffer
PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)
洗脫緩沖液Elution buffer
直接加入1*蛋白loading buffer, 98oC 5 min后棄去磁珠后,收集上清液檢測。

COIP 常見問題及對策


人骨關節(jié)炎關節(jié)軟骨間充質祖細胞的免疫磁珠分選和鑒定。上海protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠銷售

常見問題
原因
解決方法
高的背景條帶
蛋白非特異結合到抗體,磁珠或EP管上洗滌次數(shù)不夠
對裂解液進行預處理去除非特異蛋白; 在***一次洗滌前, 轉移整個樣品到新的EP管中然后進行離心。
洗滌次數(shù)不夠
增加洗滌的時間和次數(shù)。
無蛋白條帶
Myc 標簽蛋白沒有表達
確保目的蛋白帶有Flag/HA/Myc 標簽; 制備新鮮的裂解液; 使用恰當?shù)牡鞍酌敢种苿?/span>
孵育時間不足
增加孵育時間。
樣品中存在干擾物質
裂解液中存在高濃度的DTT,2-mercaptoetMyc nol或者其他的還原劑;

戊二醛兩步交聯(lián)法將辣根過氧化物酶(HRP)結合于甲胎蛋白 (AFP)抗體上制成酶標AFP抗體,質量鑒定結果表明其比活性為200 U/mg,抗體效價為1: 256,滿足酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)要求;通過滴定法確定酶標AFP抗體的**適工作稀釋度為V(酶標抗體): V(磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液)=1: 160;血清用量及孵育時間的影響實驗表明:血清100 μL,孵育時間2 h為比較好測定條件.建立了肝*患者血清AFP免疫磁珠ELISA法的規(guī)范化檢測程序.初步應用實驗顯示:免疫磁珠ELISA法測定受試健康組血清AFP值 平均為3.9 ng/mL,肝*組血清AFP值平均為316.7 ng/mL,對肝*診斷陽性率為72.0%.批內及批間CV值分別為5.05%和8.20%.該項技術有較高的靈敏度和很好的特異性,操作簡便,分離快 速,適用于肝*的初期快速診斷.上海protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠銷售BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠蛋白相互作用。

免疫磁珠細胞分選方法可以在幾分鐘內從復雜的細胞混合物中分離出很高純度的細胞。把細胞用超級順磁性的免疫磁珠特異性地標記,磁性標記完后,把這些細胞通過一個放在強而穩(wěn)定磁場中的分選柱。分選柱里的基質造成一個高梯度磁場。被磁性標記的細胞滯留在柱里而未被標記的細胞則流出。當分選柱移出磁場后,滯留柱內的磁性標記細胞就可以被洗脫出來,這樣就完全可以獲得標記和未標記的兩個細胞組份。超順磁性的磁珠的體積很小,其直徑約為50nm,體積約小于真核細胞的一百萬份之一,可與病毒的大小相比。標記細胞上的微型磁珠即使在掃描電鏡照片上也幾乎看不到。磁性抗體和磁性標記物間的反應可在幾分鐘內完成。由于微型磁珠的體積極小,所以不會對細胞造成機械性壓力,而且使孵育時間短,操作過程快。免疫磁珠形成一個穩(wěn)定的膠體液,它們在磁場中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的組成成份(氧化鐵和多糖)使其可被生物降解,且不會***細胞或影響細胞的功能和活力,細胞的生理功能也不變。磁珠不需要去除,因此,陽性分選出的細胞(即磁性標記細胞)可立即用于分析和隨后的實驗。

偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描的增強作用.方法:經尾靜脈注射SPC-A1-luc細胞建立肺腺*裸鼠模型,生物發(fā)光成像定量監(jiān)測**的大小.裸鼠分為:生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組,每周分別注射生理鹽水,750nm裸磁珠溶液和偶聯(lián)NJ001的750nm免疫磁珠溶液,于注射前和注射后4h進行micro-CT掃描.利用免疫組織化學驗證**組織中NJ001特異性抗原SP70的表達.結果:免疫磁珠組在第4周即可檢測到**,而生理鹽水組和裸磁珠組均到第6周才能檢測到.第6周生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組micro-CT掃描**的灰度值分別為注射前的59.05±0.66,60.69±0.55和58.25±0.32,注射后的60.30±1.83,61.05±0.68和67.41±3.82.與注射前相比,免疫磁珠組注射后的灰度值***增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.0079).生理鹽水組和裸磁珠組注射后的灰度值與注射前相比差異均無統(tǒng)計學意義(均P0.05).結論:偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描有增強作用,并且有望用于肺*的早期診斷.納米免疫磁珠富集單核增生李斯特菌的研究。

免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質瘤干細胞的方法.方法將術中取得的腦膠質瘤標本,通過剪切,消化和吹打成單細胞懸液,篩網過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133^+細胞,用神經干細胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細胞克隆能力的細胞球,取第3代進行誘導分化,分化前后用免疫細胞熒光化學方法鑒定**干細胞及分化后細胞.結果免疫磁珠分選出的CD133^+細胞,可懸浮生長并形成神經干細胞樣細胞球,有較強的增殖能力,干細胞標志物巢蛋白(nestin)陽性,分化后細胞表達神經元小管相關蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質細胞膠質纖維酸性蛋白質(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白,CD133^+陰性,并具有**的核型.結論免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細胞混雜生長的發(fā)生,能夠從大量腫瘤細胞中分離出只占極少比例的**干細胞,細胞結合磁珠后在體外可以長期培養(yǎng)和傳代,進一步證實了**干細胞的存在,并為膠質瘤干細胞的研究奠定基礎.用免疫磁珠法檢測抗白念珠*烯醇化酶抗體。廣東protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起

多聚抗原肽免疫磁珠在制備單表位抗體中的應用。上海protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠銷售

免疫共沉淀(COIP)優(yōu)點

(1)相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài);

(2)蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進行的,可以避免人為的影響;

(3)可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復合物。

免疫共沉淀(COIP)缺點

(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用;

(2)兩種蛋白質的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;

(3)必須在實驗前預測目的蛋白是什么,以選擇***檢測的抗體,所以,若預測不正確,實驗就得不到結果,方法本身具有冒險性。

(4)靈敏度沒有親和色譜高。 上海protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠銷售

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標簽: 免疫磁珠