常見問題及對策

5： 磁珠在使用過程中出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象？

磁珠在使用時如果出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散，容易導(dǎo)致分 布不均，出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的 結(jié)合在一起。用超聲波水浴處理 2min 即可打散磁珠使其重新分散， 但應(yīng)注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。

緩沖液匯總

Co-IP & CHIP磁珠緩沖液匯總：

細(xì)胞裂解液：正常RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液(一般是公司購買)

抗體磁珠結(jié)合buffer：PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

Washing buffer: PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

抗原與抗體/磁珠復(fù)合物binding buffer：可以用RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液代替

Washing buffer: PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)

6、Elution buffer: (1)變性洗脫緩沖液，直接加入1*蛋白loading buffer, 98^oC 5 min后棄去磁珠后，收集上清液檢測。（2）非變性洗脫緩沖液：Elution buffer: 0.1 M -0.2 M Glycine, 0.1%-0.5% Triton 100 or Tween 20, pH 2.5-3.1。

    免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細(xì)胞,獲得同質(zhì)性骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.方法:實(shí)驗(yàn)于2004-06/2005-06在東南大學(xué)修復(fù)重建外科研究所實(shí)驗(yàn)室完成.采集正常自愿獻(xiàn)髓者骨髓,淋巴細(xì)胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細(xì)胞,研究其生長曲線,體外擴(kuò)增能力,集落形成能力,細(xì)胞表型,細(xì)胞周期,成骨能力.結(jié)果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細(xì)胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細(xì)胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞梭形外觀.②生長曲線可分為細(xì)胞生長延滯期,對數(shù)生長期及穩(wěn)定期,細(xì)胞倍增時間為57h.③STRO-1^+細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增12周左右,形成的成纖維細(xì)胞集落數(shù),處于細(xì)胞分裂期的細(xì)胞數(shù),擴(kuò)增倍數(shù)均低于傳統(tǒng)分離方法得到的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.④經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測,STRO-1^+細(xì)胞穩(wěn)定地表達(dá)CD29,CD44,CD105,不表達(dá)造血細(xì)胞系的表面標(biāo)記CD14,CD34,CD45,HLA-DR.⑤經(jīng)成骨培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞具有很強(qiáng)的成骨分化能力.結(jié)論:利用免疫磁珠能夠從成人骨髓中快速分離,純化骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,且具有高效,靈敏。吉林protein A/G COIP免疫磁珠供應(yīng)商多聚抗原肽免疫磁珠在制備單表位抗體中的應(yīng)用。

建立有效的人類神經(jīng)干細(xì)胞分離純化系統(tǒng)和方法.方法:無菌取孕24周流產(chǎn)胎兒的室下區(qū)腦組織,制備細(xì)胞懸液,用磁性微珠標(biāo)記的CD133單克隆抗體與細(xì)胞孵育,通過磁分選器分離出CD133(+)和CD133(-)細(xì)胞,通過體外培養(yǎng)并誘導(dǎo)分化,觀察CD133陽性細(xì)胞和陰性細(xì)胞的增殖情況及分化能力.結(jié)果:經(jīng)免疫磁珠分選的室下區(qū)腦組織中,CD133(+)細(xì)胞占胚胎腦組織細(xì)胞的2%左右,該細(xì)胞體外擴(kuò)增能力強(qiáng),細(xì)胞呈球形生長,并易聚集成團(tuán),培養(yǎng)5d,10d,15d,20d進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),細(xì)胞增長率分別為1.79%,4.82%,7.21%,14.66%,誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞經(jīng)染色鑒定可分化為神經(jīng)元,神經(jīng)膠質(zhì)等多種神經(jīng)細(xì)胞,陰性細(xì)胞擴(kuò)增能力弱,活細(xì)胞計(jì)數(shù)以死細(xì)胞數(shù)量居多,大約705,另外一些細(xì)胞貼壁分化.結(jié)論:免疫磁珠法簡便,有效,經(jīng)免疫磁珠分離的神經(jīng)干細(xì)胞在體外能進(jìn)一步培養(yǎng)擴(kuò)增并分化.

Anti Flag COIP磁珠

產(chǎn)品價格

產(chǎn)品描述

BEENbio Anti Flag COIP磁珠在大小為1um的納米磁珠上供價結(jié)合了大量的小鼠Anti Flag單克隆抗體，與傳統(tǒng)的Anti Flag COIP瓊脂糖凝膠比較，抗體結(jié)合能力相同，背景更低，由于采用磁性分離，使得每次COIP可以節(jié)省40%的時間。

產(chǎn)品特性

儲存條件

4^oC長期穩(wěn)定，

使用說明

磁珠的準(zhǔn)備

重懸Anti Flag 免疫磁珠，取10 μL加入到500 μL TBS，洗滌3次，分離磁珠，棄上清。

樣品的結(jié)合（binding）

在上述沉淀中加入500 μL細(xì)胞裂解液，室溫緩慢孵育2小時或者4°C條件下過夜，分離磁珠，棄上清。

結(jié)合過程中，磁珠可能會出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀，屬于正?，F(xiàn)象，不會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

洗滌（washing）：0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次，每次5min，分離磁珠，棄上清。

洗脫（elution）:上述所得沉淀中加 入50 μL 1×蛋白上樣緩沖液，煮沸5 min，冷卻后分離磁珠，吸取上清液，進(jìn)行SDS-PAGE檢測。 紅細(xì)胞膜免疫磁珠檢測成分血中抗A/抗B的研究。

免疫磁珠分離法純化抗血清的實(shí)驗(yàn)條件,并與A蛋白親和層析法比較純化效果,以求得到一種簡便,快速,高效的純化IgG方法.結(jié)果表明:從5只新西蘭兔獲得210 mL試管凝集效價高達(dá)1:5 120的兔抗鰻弧菌抗血清,磁珠與IgG結(jié)合10 min達(dá)到平衡,其比較大結(jié)合量為0.227 mg/mL;免疫磁珠分離法與A蛋白親和層析法得到的IgG純度都很高,經(jīng)過SDS-PAGE電泳都只得到25 ku和55 ku左右的兩條帶;免疫磁珠分離法得到的抗體ELISA效價高于A蛋白親和層析法;免疫磁珠分離法反應(yīng)所需時間(10 min)小于A蛋白親和層析法所需的20 min,其得率(11.5 mg/mL)也高于A蛋白親和層析法的10.25 mg/mL.CD3/CD28免疫磁珠法體外擴(kuò)增外周血T淋巴細(xì)胞。天津COIP免疫磁珠代理價格4折起

免疫磁珠法分離膽囊CancerCD133陽性細(xì)胞及其生物學(xué)特性鑒定。吉林anti-Flag COIP免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起

磁珠分離細(xì)胞STRO-1+的DPSC、EMSC中HNK-1、Nestin的表達(dá),進(jìn)一步了解DPSC的表型特點(diǎn)及與EMSC的相關(guān)性,為今后研究提供較為純化的細(xì)胞來源。方法采用間接免疫磁珠分離法獲得DPSC、EMSC,間接免疫熒光雙標(biāo)法檢測抗原HNK-1、Nestin的表達(dá)。結(jié)果磁珠分離前后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),大約有5%的DPSC為STRO-1+的細(xì)胞,大約有1%的EMSC為STRO-1+的細(xì)胞;STRO-1+的DPSC免疫熒光檢測同時表達(dá)HNK-1(++)、Nestin(+),STRO-1+的EMSC免疫熒光檢測顯示也同時表達(dá)HNK-1(++)、Nestin(++)。結(jié)論免疫磁珠分離法獲得STRO-1+陽性的DPSC共表達(dá)EMSC的標(biāo)記HNK-1和Nestin,進(jìn)一步說明二者作為間充質(zhì)來源的干細(xì)胞,細(xì)胞表型具有繼承性。吉林anti-Flag COIP免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起

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