COIP常見問題及對策
1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?
磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關(guān)，請確 認抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間（ 30～120min）、提高結(jié)合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強度（ 25～100mM NaCl）等方法提高親和效率。
2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?
可以先將抗體與樣品進行孵育，形成抗體-抗原復(fù)合物，再用 Protein A/G磁珠捕獲復(fù)合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效 率，并降低磁珠與樣品接觸的時間，從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對 于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。 BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。廣東anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起
免疫磁珠法(MACS)：免疫磁珠法是2O世紀80年代出現(xiàn)的技術(shù)方法。1983年Ugelstad提出將免疫磁珠用于細胞分選，1990年，Mihenyi建立了MACS。這一方法的**是在磁珠表面包被具免疫反應(yīng)性的抗體進行抗原抗體反應(yīng)，在細胞表面形成玫瑰花結(jié)，這些結(jié)合了磁珠的細胞一旦置于強大的磁場下，就會與其他未被結(jié)合的細胞分群，具***順磁場的磁珠脫離磁場后立即消失磁性，這樣就可以篩選或去除所標(biāo)記的細胞，從而達到陽性或陰性選擇細胞的目的。這一技術(shù)已經(jīng)***運用于細胞及分子生物學(xué)，分離基因、靶細胞及造血干細胞等。其分離效果得到了免疫熒光、PCR、FISH及FACS等方法的確認。免疫磁珠可以有效地分選細胞，從而決定了這一方法在神經(jīng)干細胞分選中應(yīng)用的技術(shù)可行性。湖北蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠生產(chǎn)廠家免疫磁珠法分離膽囊CancerCD133陽性細胞及其生物學(xué)特性鑒定。
利用免疫磁珠法分選并鑒定人前列腺*類干細胞.方法利用免疫磁珠法從人前列腺*細胞株P(guān)C3中分選CD133+/CD44+細胞,通過免疫組化,流式細胞術(shù),CCK8,平板克隆形成實驗及裸鼠成瘤實驗鑒定其表面標(biāo)志物表達情況及**干細胞特性.結(jié)果經(jīng)免疫磁珠法分選所得CD133+/CD44+細胞比例為0.50%;免疫組化及流式顯示其CD44/CD133/整合素α2β1均高表達;其細胞增殖和克隆形成率高于PC3細胞;以低密度注射時,其裸鼠體內(nèi)成瘤率明顯高于PC3細胞.結(jié)論利用免疫磁珠法可從人前列腺*細胞株P(guān)C3中高效的分選出具有**干細胞生物學(xué)特性的前列腺*類干細胞.
小鼠脾臟CD8+T細胞的免疫磁珠負性分選方法,并對分選后所得細胞進行純度、活力及功能檢測.方法以免疫磁珠負性分選法從小鼠脾臟細胞中分離CD8+T細胞,流式細胞術(shù)檢測所得細胞的純度,臺盼藍檢測細胞活力并用ConA刺激檢測增殖能力.結(jié)果經(jīng)過流式細胞儀測定免疫磁珠負性分選后的小鼠脾臟CD8+T細胞純度達到(91.6±3.6)%,臺盼蘭染色細胞活力為(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的細胞增殖.結(jié)論免疫磁珠負性分選法能夠分選出高純度的CD8+T細胞,并且不影響分選靶細胞的細胞活力和功能.BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠全國招商代理。
免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個核細胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負分選,錐蟲藍拒染實驗計數(shù)MACS分選前后細胞活力.流式細胞儀鑒定分選后細胞純度;流式細胞儀分析培養(yǎng)細胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達情況.結(jié)果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細胞生長良好,**長傳代到第20代.分選前后細胞活力分別為(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,無明顯差異;流式細胞儀分析獲取的CD45-,GlyA-細胞純度大于98%;流式細胞儀檢測hMAPCs中CD29陽性表達細胞比率為99.2%,CD44陽性細胞比率為98.3%,CD34陽性細胞比率為1.2%,HLA-DR陽性細胞比率為5.3%.結(jié)論:CD45,GlyA免疫微磁珠負分選可從骨髓中分離高純度的hMAPCs;分選后hMAPCs在自行研制的培養(yǎng)基中有較強的增殖能力.抗原肽免疫磁珠檢測BLV抗體的研究。吉林protein A/G COIP免疫磁珠性能
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