免疫磁珠分離羊水來(lái)源OCT-4陽(yáng)性胎兒干細(xì)胞的可行性.方法 采用免疫磁珠細(xì)胞分選法去除羊水細(xì)胞中CD44和SSEA4陽(yáng)性細(xì)胞,使OCT-4陽(yáng)性胎兒干細(xì)胞間接得到分離,體外培養(yǎng)擴(kuò)增后,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)特性,免疫熒光染色計(jì)算OCT-4陽(yáng)性胎兒干細(xì)胞得率,Real-TimePCR比較分離前后OCT-4表達(dá)量的差異,免疫組化檢測(cè)NANOG,AKP,MAP-2,NGFR和Myosin等細(xì)胞因子的表達(dá).結(jié)果 經(jīng)免疫磁珠分離的細(xì)胞接種12h內(nèi)貼壁生長(zhǎng),形態(tài)呈梭形,部分呈多角形,融合后形成輻射狀排列.免疫熒光染色OCT-4陽(yáng)性細(xì)胞得率為(90.15±8.25)%,Real-TimePCR檢測(cè)結(jié)果顯示分離后細(xì)胞OCT-4的表達(dá)量較未分離細(xì)胞和MSC有***性差異(P<0.01).原代培養(yǎng)可獲得(1～2)×107個(gè)細(xì)胞,3代可獲得(2～4)×108個(gè)細(xì)胞,傳至10代以后細(xì)胞的增殖能力下降.免疫組化結(jié)果顯示OCT-4陽(yáng)性胎兒干細(xì)胞表達(dá)NANOG,AKP,MAP-2和NGFR等細(xì)胞因子.結(jié)論 免疫磁珠細(xì)胞分選法可以從羊水中分離出OCT-4陽(yáng)性的胎兒干細(xì)胞,分離后的細(xì)胞保持干細(xì)胞原有特性及生物學(xué)特征,可作為組織工程種子細(xì)胞.免疫磁珠法分離純化人腎CancerCD133~+細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究。廣東protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門

免疫磁珠技術(shù)(immunomagneticbeads,IMB)是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究的一種新的免疫學(xué)技術(shù).隨著納米技術(shù)的不斷發(fā)展,納米免疫磁珠具備了良好的磁感應(yīng)性,超順磁性,高特異性,高濃縮性,高分離率,且不影響細(xì)胞活性等優(yōu)點(diǎn),因此它能從大量外周血細(xì)胞中篩選出帶有特異性制備可高效,特異地分離單增李斯特菌的免疫磁珠.探討羧基修飾磁珠與多克隆抗體的不同偶聯(lián)條件和免疫磁珠捕獲單增李斯特菌的能力.方法:以單增李斯特菌作為抗原,免疫新西蘭兔,獲得兔源多克隆抗體,鑒定其與單增李斯特菌體的結(jié)合能力;選擇6種不同的偶聯(lián)緩沖溶液,設(shè)置了6個(gè)主要偶聯(lián)時(shí)間和6組偶聯(lián)溫度,通過(guò)比較磁珠與抗體偶聯(lián)后上清中剩余的抗體量來(lái)確定比較好偶聯(lián)條件.結(jié)果:制備的多克隆抗體效價(jià)為1.3×105,該抗體與單增李斯特菌體有較好的結(jié)合,抗體與1mg羧基修飾磁珠在pH6.0的0.01mol/L一水嗎啉乙磺酸緩沖溶液(MES)中,37℃偶聯(lián)2h,偶聯(lián)抗體的量為160μg;制得的免疫磁珠的捕獲率可達(dá)77.0%.結(jié)論:獲得羧基磁珠與抗體偶聯(lián)的比較好條件,該免疫磁珠用于食品中單增李斯特菌的檢測(cè),與常規(guī)的平皿增菌培養(yǎng)顯色法比較,檢測(cè)時(shí)間至少縮短20h.標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞吉林protein A/G COIP免疫磁珠供應(yīng)商BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。

免疫磁珠法原代分離純化大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞,并確定其免疫組化特征.方法免疫磁珠法結(jié)合傳統(tǒng)的膠原酶消化及篩網(wǎng)過(guò)濾法分離出大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞,采用含有20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng).通過(guò)周細(xì)胞的形態(tài)和生長(zhǎng)方式初步鑒別,再進(jìn)行細(xì)胞α-SMA,vWF,GFAP抗體免疫組織化學(xué)特征鑒定,及激光共聚焦顯微鏡行周細(xì)胞PDGFR-β和desmin抗體熒光雙標(biāo)觀察.周細(xì)胞生長(zhǎng)曲線通過(guò)MTT法測(cè)定.結(jié)果本法獲得的周細(xì)胞純度可達(dá)98%,并能連續(xù)傳代.原代周細(xì)胞約2～3周融合,傳代后生長(zhǎng)和融合速度加快,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,胞內(nèi)可見(jiàn)絲狀結(jié)構(gòu),無(wú)接觸性抑制.免疫組化證實(shí)周細(xì)胞胞漿內(nèi)α-SMA蛋白表達(dá)陽(yáng)性,內(nèi)皮細(xì)胞特異性vWF因子表達(dá)陰性,膠質(zhì)細(xì)胞特異性GFAP表達(dá)陰性.激光共聚焦顯示周細(xì)胞PDGFR-β和desmin抗原表達(dá)均為陽(yáng)性.結(jié)論本研究***報(bào)道應(yīng)用免疫磁珠法分離培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞.獲得高度純化的周細(xì)胞具有明確的免疫組化特征,可用于相關(guān)視網(wǎng)膜血管性疾病的進(jìn)一步研究.

精原干細(xì)胞(spermatogonialstemcells,SSCs)富集純化是利用SSCs進(jìn)行基因修飾新方法等研究的前提基礎(chǔ)。采用免疫磁珠分選法,使用干細(xì)胞抗體CD90.2進(jìn)行小鼠SSCs的純化富集,并采用流式細(xì)胞分析法和定量PCR驗(yàn)證了磁珠分選效率。流式細(xì)胞分析結(jié)果:免疫磁珠分選后SSCs純度為50.11%。熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果:磁珠分選后支持細(xì)胞特異表達(dá)基因GATA4***下調(diào)(6倍)、SSCs表達(dá)基因GFRα-1上調(diào)(6.5倍)、生殖干細(xì)胞特異表達(dá)基因OCT4極***上調(diào)(5.9倍),3個(gè)基因相對(duì)表達(dá)量的變化說(shuō)明,免疫磁珠分選效率為6倍。流式細(xì)胞分析法所產(chǎn)生的偏差可能是受到了未解離磁珠及SSCs本身轉(zhuǎn)基因熒光的影響。BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。

用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過(guò)Fmoc法固相化學(xué)合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價(jià)偶聯(lián)的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過(guò)IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測(cè)定其回收率.結(jié)果:合成的MAP具有較強(qiáng)的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達(dá)1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為100mg/L,包被效率比較高可達(dá)79%.應(yīng)用MAP免疫磁珠從抗血清中純化得到的單表位抗體,經(jīng)鑒定與其他抗原表位無(wú)反應(yīng)性,其純度為95%,抗體的回收率為5.8%.結(jié)論:MAP包被的磁珠可快速分離純化出針對(duì)某一抗原表位的特異性抗體,其性質(zhì)類似單克隆抗體.這一方案在快速制備少量高特異性抗體中具有廣闊的應(yīng)用前景.應(yīng)用免疫磁珠分離法純化弓形蟲(chóng)速殖子的研究。廣東protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠市場(chǎng)報(bào)價(jià)

免疫磁珠技術(shù)應(yīng)用于肺Cancer中的研究進(jìn)展。廣東protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門

從白血病KG1a細(xì)胞中分選CD34+CD38-干細(xì)胞并研究其生物學(xué)特性.方法免疫磁珠法分選CD34+CD38-細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表面膜抗原,細(xì)胞周期,甲基纖維素培養(yǎng)體系觀察其克隆性;以HL60,K562,CD34+CD38+細(xì)胞為對(duì)照,甲基偶氮唑藍(lán)法檢測(cè)柔紅霉素對(duì)CD34+CD38-細(xì)胞的抑制作用;BALB/c裸鼠皮下接種,觀察體內(nèi)成瘤能力.結(jié)果分選的CD34+CD38-細(xì)胞純度達(dá)95%以上,(69.03±3.25)%處于G0期,克隆形成率為(38.64±2.68)%,明顯抵抗柔紅霉素;不同濃度柔紅霉素作用后,CD34+CD38-,CD34+CD38+,HL60,K562細(xì)胞的活性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=961.136,P=0.000);CD34+CD38-在裸鼠皮下成瘤率***高于CD34+CD38+細(xì)胞(P〈0.05).結(jié)論免疫磁珠法分選白血病干細(xì)胞簡(jiǎn)單易行,分選的細(xì)胞符合白血病干細(xì)胞生物學(xué)特性.廣東protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門

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