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湖北anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

來源: 發(fā)布時間:2022-02-22

Anti HA COIP磁珠

產(chǎn)品價格


產(chǎn)品貨號
規(guī)格
價格
BEENbio-PR003-0.4
0.4 mL
1150 RMB
BEENbio-PR003-1
1 mL
1780 RMB
BEENbio-PR003-5
5 mL
6825 RMB


產(chǎn)品描述

BEENbio Anti HA COIP磁珠在大小為2um的納米磁珠上供價結(jié)合了大量的小鼠Anti HA單克隆抗體,與傳統(tǒng)的Anti HA COIP瓊脂糖凝膠比較,抗體結(jié)合能力相同,背景更低,由于采用磁性分離,使得每次COIP可以節(jié)省40%的時間。


產(chǎn)品特性


項目
特性
抗體亞型
鼠源IgG1
抗體純化方法
Protein A 純化制備
適用范圍
免疫共沉淀(IP),HA tag蛋白純化
推薦使用體積
COIP: 500μl 細胞裂解液 使用 10μL磁珠
融合蛋白結(jié)合容量
大于1.1 mg HA tagged protein/mL 磁珠



儲存條件

4oC長期穩(wěn)定


使用說明

磁珠的準(zhǔn)備

重懸Anti HA 免疫磁珠,取10 μL加入到500 μL TBS,洗滌3次,分離磁珠,棄上清。

樣品的結(jié)合(binding)

在上述沉淀中加入500 μL細胞裂解液,室溫緩慢孵育2小時或者4°C條件下過夜,分離磁珠,棄上清。

注意:結(jié)合過程中,磁珠可能會出現(xiàn)聚團或呈片狀,屬于正?,F(xiàn)象,不會影響實驗結(jié)果。

洗滌(washing):0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次,每次5min,分離磁珠,棄上清。

洗脫(elution):上述所得沉淀中加 50 μL 1×蛋白上樣緩沖液,煮沸5 min,冷卻后分離磁珠,吸取上清液,進行SDS-PAGE檢測。 免疫磁珠陰性法富集惡性胸腔積液中腫瘤細胞方法的建立。湖北anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

免疫共沉淀(COIP)優(yōu)點

(1)相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài);

(2)蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進行的,可以避免人為的影響;

(3)可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。

免疫共沉淀(COIP)缺點

(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用;

(2)兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;

(3)必須在實驗前預(yù)測目的蛋白是什么,以選擇***檢測的抗體,所以,若預(yù)測不正確,實驗就得不到結(jié)果,方法本身具有冒險性。

(4)靈敏度沒有親和色譜高。 河南anti-Flag COIP免疫磁珠送貨上門BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。

常用的磁珠法DNA提取試劑盒,國外的有Dynal、Qiagen等,國內(nèi)將磁珠應(yīng)用于核酸提取的研究起源于02年左右,經(jīng)過近些年的反復(fù)試驗,形成了穩(wěn)定的核酸提取體系,并已被***用于一些疾?。ㄈ缫腋?、丙肝、結(jié)核菌)等的定量檢測(如惠爾納米的系列磁珠法核酸提取試劑盒)。國產(chǎn)磁珠法試劑盒與進口產(chǎn)品相比,已不單單是只具有價格優(yōu)勢,其產(chǎn)品的穩(wěn)定性、高效性、提取出的核酸的質(zhì)量與產(chǎn)量都足以與進口磁珠法試劑盒媲美。但是進口試劑盒長期以來形成的完善的銷售渠道對國產(chǎn)試劑盒的推廣是一大挑戰(zhàn)。

COIP 磁珠緩沖液匯總

細胞裂解液
正常RIPA 細胞裂解緩沖液(一般是公司購買)
結(jié)合緩沖液binding buffer
用RIPA 細胞裂解緩沖液代替
洗滌緩沖液Washing buffer
PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)
洗脫緩沖液Elution buffer
直接加入1*蛋白loading buffer, 98oC 5 min后棄去磁珠后,收集上清液檢測。

COIP 常見問題及對策


BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。

常見問題
原因
解決方法
高的背景條帶
蛋白非特異結(jié)合到抗體,磁珠或EP管上洗滌次數(shù)不夠
對裂解液進行預(yù)處理去除非特異蛋白; 在***一次洗滌前, 轉(zhuǎn)移整個樣品到新的EP管中然后進行離心。
洗滌次數(shù)不夠
增加洗滌的時間和次數(shù)。
無蛋白條帶
Myc 標(biāo)簽蛋白沒有表達
確保目的蛋白帶有Flag/HA/Myc 標(biāo)簽; 制備新鮮的裂解液; 使用恰當(dāng)?shù)牡鞍酌敢种苿?/span>
孵育時間不足
增加孵育時間。
樣品中存在干擾物質(zhì)
裂解液中存在高濃度的DTT,2-mercaptoetMyc nol或者其他的還原劑;

Anti Flag COIP磁珠

產(chǎn)品價格


產(chǎn)品貨號
規(guī)格
價格
Beenbio -PR002-0.4
0.4 mL
1150 RMB
Beenbio -PR002-1
mL
1780 RMB
Beenbio -PR002-5
5 mL
6825 RMB


產(chǎn)品描述

BEENbio Anti Flag COIP磁珠在大小為1um的納米磁珠上供價結(jié)合了大量的小鼠Anti Flag單克隆抗體,與傳統(tǒng)的Anti Flag COIP瓊脂糖凝膠比較,抗體結(jié)合能力相同,背景更低,由于采用磁性分離,使得每次COIP可以節(jié)省40%的時間。


產(chǎn)品特性


項目
特性
抗體亞型
鼠源IgG1
抗體純化方法
Protein A 純化制備
適用范圍
免疫共沉淀(IP),Flag tag蛋白純化
推薦使用體積
COIP: 500μl 細胞裂解液 使用 10μL磁珠
融合蛋白結(jié)合容量
大于1.1 mg Flag tagged protein/mL 磁珠



儲存條件

4oC長期穩(wěn)定,


使用說明

磁珠的準(zhǔn)備

重懸Anti Flag 免疫磁珠,取10 μL加入到500 μL TBS,洗滌3次,分離磁珠,棄上清。

樣品的結(jié)合(binding)

在上述沉淀中加入500 μL細胞裂解液,室溫緩慢孵育2小時或者4°C條件下過夜,分離磁珠,棄上清。

結(jié)合過程中,磁珠可能會出現(xiàn)聚團或呈片狀,屬于正?,F(xiàn)象,不會影響實驗結(jié)果。

洗滌(washing):0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次,每次5min,分離磁珠,棄上清。

洗脫(elution):上述所得沉淀中加 50 μL 1×蛋白上樣緩沖液,煮沸5 min,冷卻后分離磁珠,吸取上清液,進行SDS-PAGE檢測。 BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。黑龍江anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

應(yīng)用免疫磁珠分離法純化弓形蟲速殖子的研究。湖北anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

COIP實驗步驟
第三步:免疫共沉淀
根據(jù)不同的抗體結(jié)合方式,這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同,但是本質(zhì)是一樣的,都是為了形成抗原-蛋白復(fù)合物。
如果直接使用 Protein A/G 結(jié)合的 beads,先進行細胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育,再加入 beads 將蛋白-抗體復(fù)合物拉下來。
如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定,或者直接將抗體固定在 beads,則將固定抗體的 beads 與細胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。
增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ,可以降低非特異性結(jié)合,以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。
第四步:洗脫與檢測
***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物洗脫,并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測鑒定蛋白。當(dāng)?shù)鞍谆蚩贵w對低 pH 的緩沖液敏感,可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。
注意事項:
如后續(xù)需進行酶活或功能性分析,則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進行洗脫。
對于交聯(lián)劑結(jié)合的 beads,為了保持抗體偶聯(lián)樹脂的活性,應(yīng)立即再生和存儲樹脂,保證抗體可以重復(fù)利用。
湖北anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

上海普平生物科技有限公司位于高逸路112-118號3幢5286室。普平生物致力于為客戶提供良好的科研試劑、耗材、儀器,納米脂質(zhì)體,細胞、分子、蛋白實驗,科研項目,一切以用戶需求為中心,深受廣大客戶的歡迎。公司秉持誠信為本的經(jīng)營理念,在化工深耕多年,以技術(shù)為先導(dǎo),以自主產(chǎn)品為重點,發(fā)揮人才優(yōu)勢,打造化工良好品牌。普平生物秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實”的經(jīng)營理念,全力打造公司的重點競爭力。

標(biāo)簽: 免疫磁珠