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廣東protein A/G COIP免疫磁珠性能

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-30

抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進(jìn)行初步應(yīng)用。方法采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹(shù)脂DE52進(jìn)一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測(cè)乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果共獲得5株雜交瘤細(xì)胞株,其中1F12細(xì)胞株分泌的抗體效價(jià)、相對(duì)親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達(dá)95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價(jià)為106,相對(duì)親和力為0.2mg/L,與FITC標(biāo)記的BSA可特異性結(jié)合;納米磁性粒子的平均粒徑為150nm,鐵含量為71.63%;羧基磁性微球的平均粒徑為210nm,羧基含量約為2.15mmol/g;每克羧基磁性微球可結(jié)合抗熒光素單克隆抗體約12mg,制備的免疫磁珠可有效結(jié)合熒光素標(biāo)記的蛋白。應(yīng)用抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的靈敏度高于ELISA試劑,檢測(cè)限達(dá)0.1ng/ml。結(jié)論成功制備了抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,其具有應(yīng)用于免疫檢測(cè)分析的價(jià)值。用免疫磁珠法檢測(cè)抗白念珠*烯醇化酶抗體。廣東protein A/G COIP免疫磁珠性能

免疫磁珠(Immunomagneticbead,IMB)技術(shù)是20世紀(jì)80年代出現(xiàn)的技術(shù)方法。以免疫學(xué)為基礎(chǔ),滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化及分子遺傳學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域,其在免疫檢測(cè)、細(xì)胞分離、生物大分子純化和分子生物學(xué)等方面有著越來(lái)越***的使用。免疫磁珠的結(jié)構(gòu):磁珠是由**金屬顆粒(Fe2O3,Fe3O4),**外層包裹的高分子材料(如聚苯乙烯、聚氯乙烯)和**外層的功能配基(如-NH2,-COOH、-OH、-CHO)組成。免疫磁珠在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用:1.細(xì)胞分選,2.蛋白質(zhì)/抗體分離與純化。3.核酸分離純化核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。4.免疫檢測(cè)免疫磁珠由于粒徑小,比表面積大,可捕獲較多的待測(cè)物,并直接在其表面進(jìn)行酶顯色、熒光或同位素顯示,從而建立了一系列檢測(cè)速度快、特異性高、靈敏度高和重復(fù)性好的免疫檢測(cè)方法。湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠市場(chǎng)報(bào)價(jià)利用BEENBIO免疫磁珠技術(shù)檢測(cè)大腸*細(xì)胞。

免疫共沉淀(COIP)實(shí)驗(yàn)過(guò)程
(1)轉(zhuǎn)染后24-48 h 可收獲細(xì)胞,加入適量細(xì)胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min, 細(xì)胞裂解液于4°C, 最大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清;
(2)取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過(guò)夜;
(3)取10μl protein A 瓊脂糖珠,用適量裂解緩沖液洗3 次,每次3,000 rpm離心3 min;
(4)將預(yù)處理過(guò)的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過(guò)夜的細(xì)胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h,使抗體與protein A瓊脂糖珠耦聯(lián);
(5)免疫沉淀反應(yīng)后,在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3-4次;***加入15μl的2×SDS 上樣緩沖液,沸水煮5分鐘;
(6)SDS-PAGE, Western blotting或質(zhì)譜儀分析。
注意的問(wèn)題:
(1)細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,多采用非離子變性劑(NP40或Triton X-100)。每種細(xì)胞的裂解條件是不一樣的,通過(guò)經(jīng)驗(yàn)確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑,如商品化的cocktailer。
(2)使用明確的抗體,可以將幾種抗體共同使用。
(3)使用對(duì)照抗體:

人腦**組織中分離,培養(yǎng),純化和鑒定腦**干細(xì)胞(BTSCs),探討CD133免疫磁珠分選方法獲取BTSCs的可行性及BTSCs的生物學(xué)特性.方法:留取人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤新鮮標(biāo)本,分離獲得腦腫瘤細(xì)胞.應(yīng)用CD133免疫磁珠分選方法純化BTSCs;流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選陽(yáng)性率;神經(jīng)球計(jì)數(shù)法分析CD133+/-亞群細(xì)胞神經(jīng)球形成情況;免疫熒光方法檢測(cè)CD133+/-亞群細(xì)胞表面神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)標(biāo)記物CD133,神經(jīng)巢蛋白(nestin)表達(dá)情況;檢測(cè)CD133+/-亞群細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化后細(xì)胞表面分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)情況.結(jié)果:CD133+亞群細(xì)胞具有干細(xì)胞特性,可形成明顯的神經(jīng)球,具有自我更新和明顯的增殖能力,并且NSCs標(biāo)記物CD133,nestin表達(dá)陽(yáng)性,經(jīng)誘導(dǎo)分化后分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)陽(yáng)性;CD133-亞群細(xì)胞無(wú)上述特性.結(jié)論:CD133免疫磁珠分選方法獲得的CD133+亞群細(xì)胞即為BTSCs,該方法可以得到高純度的BTSCs,可以用于BTSCs的實(shí)驗(yàn)研究.免疫磁珠富集與免疫層析一體化檢測(cè)甲型流感病毒的研究。

探討小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞的免疫磁珠負(fù)性分選方法,并對(duì)分選后所得細(xì)胞進(jìn)行純度、活力及功能檢測(cè).方法以免疫磁珠負(fù)性分選法從小鼠脾臟細(xì)胞中分離CD8+T細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)所得細(xì)胞的純度,臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞活力并用ConA刺激檢測(cè)增殖能力.結(jié)果經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定免疫磁珠負(fù)性分選后的小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞純度達(dá)到(91.6±3.6)%,臺(tái)盼蘭染色細(xì)胞活力為(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的細(xì)胞增殖.結(jié)論免疫磁珠負(fù)性分選法能夠分選出高純度的CD8+T細(xì)胞,并且不影響分選靶細(xì)胞的細(xì)胞活力和功能.紅細(xì)胞膜免疫磁珠檢測(cè)成分血中抗A/抗B的研究。湖南anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠經(jīng)銷商價(jià)格4折起

BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠全國(guó)招商代理。廣東protein A/G COIP免疫磁珠性能

進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái),國(guó)內(nèi)精細(xì)化工業(yè)進(jìn)入了新的發(fā)展時(shí)期,涌現(xiàn)了一大批規(guī)模加工企業(yè),使精細(xì)化工的生產(chǎn)門(mén)類、品種不斷增加,領(lǐng)域日益擴(kuò)大,精細(xì)化工成為充滿活力的朝陽(yáng)工業(yè)。單一功能的科研試劑、耗材、儀器,納米脂質(zhì)體,細(xì)胞、分子、蛋白實(shí)驗(yàn),科研項(xiàng)目已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)代工業(yè)的巨大需求,多樣化的產(chǎn)品已勢(shì)在必行。如復(fù)合陶瓷耐高溫防腐涂料、導(dǎo)電聚苯胺重防腐蝕涂料、自愈合重防腐涂料、納米復(fù)合粉末滲鋅加重防腐涂料。與此同時(shí),化工行業(yè)市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)加劇,將物流環(huán)節(jié)從生產(chǎn)企業(yè)剝離出來(lái)實(shí)現(xiàn)整體外包,繼而推行第三方物流以及供應(yīng)鏈管理,是有限責(zé)任公司(自然)企業(yè)增強(qiáng)市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的另一突破。如今,上海普平生物科技有限公司上海普平生物科技有限公司上海普平生物科技有限公司從事生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓;實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、化工原料及產(chǎn)品的銷售;計(jì)算機(jī)軟件開(kāi)發(fā);計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)工程;從事貨物及技術(shù)進(jìn)出口業(yè)務(wù)。 行業(yè)紛紛走向規(guī)模化、智能化的道路。加上我國(guó)的產(chǎn)業(yè)政策,從環(huán)保的角度、從安全的角度,也要求生產(chǎn)方式從以前傳統(tǒng)的單體設(shè)備的生產(chǎn),變成自動(dòng)化、清潔化的生產(chǎn)裝置。廣東protein A/G COIP免疫磁珠性能

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標(biāo)簽: 免疫磁珠