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廣東anti-Flag COIP免疫磁珠批量定制

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-29

免疫共沉淀(COIP)優(yōu)點(diǎn)

(1)相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài);

(2)蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的,可以避免人為的影響;

(3)可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。

免疫共沉淀(COIP)缺點(diǎn)

(1)可能檢測(cè)不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用;

(2)兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;

(3)必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)目的蛋白是什么,以選擇***檢測(cè)的抗體,所以,若預(yù)測(cè)不正確,實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果,方法本身具有冒險(xiǎn)性。

(4)靈敏度沒有親和色譜高。 BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。廣東anti-Flag COIP免疫磁珠批量定制

免疫磁珠法(MACS):免疫磁珠法是2O世紀(jì)80年代出現(xiàn)的技術(shù)方法。1983年Ugelstad提出將免疫磁珠用于細(xì)胞分選,1990年,Mihenyi建立了MACS。這一方法的**是在磁珠表面包被具免疫反應(yīng)性的抗體進(jìn)行抗原抗體反應(yīng),在細(xì)胞表面形成玫瑰花結(jié),這些結(jié)合了磁珠的細(xì)胞一旦置于強(qiáng)大的磁場(chǎng)下,就會(huì)與其他未被結(jié)合的細(xì)胞分群,具***順磁場(chǎng)的磁珠脫離磁場(chǎng)后立即消失磁性,這樣就可以篩選或去除所標(biāo)記的細(xì)胞,從而達(dá)到陽性或陰性選擇細(xì)胞的目的。這一技術(shù)已經(jīng)***運(yùn)用于細(xì)胞及分子生物學(xué),分離基因、靶細(xì)胞及造血干細(xì)胞等。其分離效果得到了免疫熒光、PCR、FISH及FACS等方法的確認(rèn)。免疫磁珠可以有效地分選細(xì)胞,從而決定了這一方法在神經(jīng)干細(xì)胞分選中應(yīng)用的技術(shù)可行性。黑龍江anti-Myc COIP免疫磁珠代理價(jià)格4折起納米免疫磁珠富集單核增生李斯特菌的研究。

COIP 磁珠緩沖液匯總

細(xì)胞裂解液
正常RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液(一般是公司購買)
結(jié)合緩沖液binding buffer
用RIPA 細(xì)胞裂解緩沖液代替
洗滌緩沖液Washing buffer
PBST(1*PBS + 1% Triton X-100)
洗脫緩沖液Elution buffer
直接加入1*蛋白loading buffer, 98oC 5 min后棄去磁珠后,收集上清液檢測(cè)。

COIP 常見問題及對(duì)策


常見問題
原因
解決方法
高的背景條帶
蛋白非特異結(jié)合到抗體,磁珠或EP管上洗滌次數(shù)不夠
對(duì)裂解液進(jìn)行預(yù)處理去除非特異蛋白; 在***一次洗滌前, 轉(zhuǎn)移整個(gè)樣品到新的EP管中然后進(jìn)行離心。
洗滌次數(shù)不夠
增加洗滌的時(shí)間和次數(shù)。
無蛋白條帶
Myc 標(biāo)簽蛋白沒有表達(dá)
確保目的蛋白帶有Flag/HA/Myc 標(biāo)簽; 制備新鮮的裂解液; 使用恰當(dāng)?shù)牡鞍酌敢种苿?/span>
孵育時(shí)間不足
增加孵育時(shí)間。
樣品中存在干擾物質(zhì)
裂解液中存在高濃度的DTT,2-mercaptoetMyc nol或者其他的還原劑;

利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經(jīng)分離培養(yǎng)獲得大量,高純度雪旺細(xì)胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無菌條件下取雙側(cè)坐骨神經(jīng),解剖鏡下剝離去除神經(jīng)外膜,獲得神經(jīng)束,將神經(jīng)束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養(yǎng)液培養(yǎng).7d后應(yīng)用免疫磁珠法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行純化培養(yǎng),培養(yǎng)2d后進(jìn)行傳代接種.培養(yǎng)過程中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,計(jì)數(shù)及活力測(cè)定;MTY法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,采用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定并且計(jì)算所得細(xì)胞純度.[結(jié)果]分離培養(yǎng)所得細(xì)胞即為雪旺細(xì)胞;采用免疫磁珠法能對(duì)培養(yǎng)所得雪旺細(xì)胞進(jìn)行純化.純化后雪旺細(xì)胞活力為96%±0.5%,純度98%±1.1%,培養(yǎng)2d后就可以傳代.[結(jié)論]免疫磁珠法可以用于雪旺細(xì)胞的純化培養(yǎng),所得雪旺細(xì)胞純度高,活力強(qiáng),能滿足組織工程人工神經(jīng)的需要.BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。

COIP實(shí)驗(yàn)步驟
第三步:免疫共沉淀
根據(jù)不同的抗體結(jié)合方式,這里的免疫共沉淀步驟會(huì)稍有不同,但是本質(zhì)是一樣的,都是為了形成抗原-蛋白復(fù)合物。
如果直接使用 Protein A/G 結(jié)合的 beads,先進(jìn)行細(xì)胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育,再加入 beads 將蛋白-抗體復(fù)合物拉下來。
如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定,或者直接將抗體固定在 beads,則將固定抗體的 beads 與細(xì)胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。
增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ,可以降低非特異性結(jié)合,以防止蛋白在陰性對(duì)照樹脂實(shí)驗(yàn)樣品中被檢測(cè)到。
第四步:洗脫與檢測(cè)
***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物洗脫,并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測(cè)鑒定蛋白。當(dāng)?shù)鞍谆蚩贵w對(duì)低 pH 的緩沖液敏感,可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。
注意事項(xiàng):
如后續(xù)需進(jìn)行酶活或功能性分析,則需使用兼容下游檢測(cè)的 Elution buffer 進(jìn)行洗脫。
對(duì)于交聯(lián)劑結(jié)合的 beads,為了保持抗體偶聯(lián)樹脂的活性,應(yīng)立即再生和存儲(chǔ)樹脂,保證抗體可以重復(fù)利用。
BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。廣東蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠生產(chǎn)廠家

免疫磁珠法富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究進(jìn)展。廣東anti-Flag COIP免疫磁珠批量定制

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)社會(huì)邁入新時(shí)代,化工行業(yè)在增強(qiáng)供給、**供給和高質(zhì)量供給上持續(xù)發(fā)力,也將面臨如何努力正確探索平穩(wěn)健康運(yùn)行和高質(zhì)量發(fā)展的新機(jī)遇。世界各國(guó)對(duì)環(huán)境保護(hù)和綠色發(fā)展的重視程度日益提升,出臺(tái)了很多環(huán)境方面的政策、法規(guī),同時(shí)環(huán)境執(zhí)法力度也在逐步提高,化工有限責(zé)任公司(自然)企業(yè)需要積極探索綠色低碳、安全環(huán)保的技術(shù),加強(qiáng)與信息化技術(shù)融合,盡可能地發(fā)展環(huán)保型產(chǎn)品,實(shí)現(xiàn)清潔生產(chǎn),并在節(jié)約能源和資源方面,采用工藝技術(shù),降低原材料消耗;配備廢水、廢氣、廢固處理設(shè)備,極大限度地降低三廢排放量,增加節(jié)水措施,提高水的重復(fù)利用率等??梢哉f,“綠色化工”已經(jīng)成為行業(yè)發(fā)展潮流??蒲性噭?、耗材、儀器,納米脂質(zhì)體,細(xì)胞、分子、蛋白實(shí)驗(yàn),科研項(xiàng)目應(yīng)用于國(guó)民經(jīng)濟(jì)和****的眾多領(lǐng)域中,成為我國(guó)化工體系中市場(chǎng)需求增長(zhǎng)**快的領(lǐng)域之一,近年來很多產(chǎn)品的消費(fèi)量年均增長(zhǎng)都在10%以上。近年來,隨著招商型飛速增長(zhǎng)、人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)和環(huán)境保護(hù)工作力度的加大,中國(guó)化工產(chǎn)業(yè)取得了較大的發(fā)展。在我國(guó)和各級(jí)相關(guān)部門不斷加大重視并持續(xù)增加收入,以及伴隨著工業(yè)發(fā)展產(chǎn)生的大量市場(chǎng)需求等方面因素的作用下,中國(guó)城市化工行業(yè)始終保持較快增長(zhǎng)。廣東anti-Flag COIP免疫磁珠批量定制

上海普平生物科技有限公司致力于化工,以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)***管理的追求。普平生物擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì),以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供科研試劑、耗材、儀器,納米脂質(zhì)體,細(xì)胞、分子、蛋白實(shí)驗(yàn),科研項(xiàng)目。普平生物繼續(xù)堅(jiān)定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,既要實(shí)現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長(zhǎng),又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域,實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。普平生物始終關(guān)注化工行業(yè)。滿足市場(chǎng)需求,提高產(chǎn)品價(jià)值,是我們前行的力量。

標(biāo)簽: 免疫磁珠