COIP常見問題及對策

1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?

磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關(guān)，請確 認抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間（ 30～120min）、提高結(jié)合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強度（ 25～100mM NaCl）等方法提高親和效率。

2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?

可以先將抗體與樣品進行孵育，形成抗體-抗原復(fù)合物，再用 Protein A/G磁珠捕獲復(fù)合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效 率，并降低磁珠與樣品接觸的時間，從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對 于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。 免疫磁珠的制備及其富集,分離單增李斯特菌的研究。湖北anti-Myc COIP免疫磁珠性能

兔前軟骨干細胞PSCs,(precartilagiousstemcells)的分離,培養(yǎng)方法及增殖,表型特征,為細胞移植***椎間盤退變,提供合適的種子細胞.[方法]取胎兔骨骺周圍軟骨膜(LaCroix環(huán))中的細胞進行原代培養(yǎng),然后采用免疫磁珠分離系統(tǒng)分選純化PSCs.體外培養(yǎng),傳代,凍存復(fù)蘇,繪制生長曲線,觀察細胞特性.分別采用免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定純化后的PSCs.[結(jié)果]免疫磁珠分離可獲得純度較高的兔PSCs,培養(yǎng)后成活率高,細胞狀態(tài)良好.細胞凍存復(fù)蘇后,細胞增殖速度,細胞形態(tài)及表面標志物無明顯變化.免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定后,細胞都有明顯的PSCs表面特異性標記物的表達.[結(jié)論]PSCs存在于LaCroix環(huán)中,免疫磁珠分離法得到的PSCs,體外培養(yǎng)條件下,細胞增殖較快,生物學(xué)特性穩(wěn)定.北京anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠蛋白相互作用。

免疫磁性細胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實驗于2006—07/08在南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心完成。6~8周齡的SPF級純系BALB,C雄性小鼠10只,體質(zhì)量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細胞,利用免疫磁性細胞分選系統(tǒng),通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按500μL/10^8加入Buffer重懸細胞。Buffer 500μL潤MS柱,懸液過柱后,Buffer 500μL/次洗柱3次,柱子脫離磁場,加1mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit^+lin^-細胞,收集到c-kit^+lin-細胞,細胞計數(shù)。取2.0x108個細胞分成10等份,流式細胞儀分析c-Kit^+lin^-細胞純度,計算回收率,評估純化效率,苔盼蘭染色檢測純化前后的細胞活力。計算活細胞的百分率。細胞純度和細胞回收率的計算:細胞純度:分離產(chǎn)物中的陽性細胞數(shù),分離細胞的總細胞數(shù)×100%,細胞回收率:分離產(chǎn)物中的陽性細胞數(shù),起始標本陽性細胞總數(shù)×100%。

免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細胞的方法.方法將術(shù)中取得的腦膠質(zhì)瘤標本,通過剪切,消化和吹打成單細胞懸液,篩網(wǎng)過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133^+細胞,用神經(jīng)干細胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細胞克隆能力的細胞球,取第3代進行誘導(dǎo)分化,分化前后用免疫細胞熒光化學(xué)方法鑒定**干細胞及分化后細胞.結(jié)果免疫磁珠分選出的CD133^+細胞,可懸浮生長并形成神經(jīng)干細胞樣細胞球,有較強的增殖能力,干細胞標志物巢蛋白(nestin)陽性,分化后細胞表達神經(jīng)元小管相關(guān)蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質(zhì)細胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白,CD133^+陰性,并具有**的核型.結(jié)論免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細胞混雜生長的發(fā)生,能夠從大量腫瘤細胞中分離出只占極少比例的**干細胞,細胞結(jié)合磁珠后在體外可以長期培養(yǎng)和傳代,進一步證實了**干細胞的存在,并為膠質(zhì)瘤干細胞的研究奠定基礎(chǔ).BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。

建立有效的人類神經(jīng)干細胞分離純化系統(tǒng)和方法.方法:無菌取孕24周流產(chǎn)胎兒的室下區(qū)腦組織,制備細胞懸液,用磁性微珠標記的CD133單克隆抗體與細胞孵育,通過磁分選器分離出CD133(+)和CD133(-)細胞,通過體外培養(yǎng)并誘導(dǎo)分化,觀察CD133陽性細胞和陰性細胞的增殖情況及分化能力.結(jié)果:經(jīng)免疫磁珠分選的室下區(qū)腦組織中,CD133(+)細胞占胚胎腦組織細胞的2%左右,該細胞體外擴增能力強,細胞呈球形生長,并易聚集成團,培養(yǎng)5d,10d,15d,20d進行活細胞計數(shù),細胞增長率分別為1.79%,4.82%,7.21%,14.66%,誘導(dǎo)分化后的細胞經(jīng)染色鑒定可分化為神經(jīng)元,神經(jīng)膠質(zhì)等多種神經(jīng)細胞,陰性細胞擴增能力弱,活細胞計數(shù)以死細胞數(shù)量居多,大約705,另外一些細胞貼壁分化.結(jié)論:免疫磁珠法簡便,有效,經(jīng)免疫磁珠分離的神經(jīng)干細胞在體外能進一步培養(yǎng)擴增并分化.BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠全國招商代理。廣東anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起

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一種免疫磁珠及制作方法和用于檢測的方法及測試板,所述的免疫磁珠至少由磁性載體微球組成,該磁性載體微球結(jié)合有至少一種免疫配基;所述的磁性載體微球由磁性納米粒和高分子骨架材料組成,其**為金屬小顆粒,**外為高分子材料,**外層為帶有各種可以結(jié)合不同免疫配基功能基因的功能層;免疫磁珠的制作方法包括:磁珠預(yù)處理;活化磁珠;偶聯(lián)抗體的制作;對偶聯(lián)抗體用封閉液封閉;免疫磁珠純化等;用于檢測的方法是:利用免疫學(xué)反應(yīng)夾心法,競爭法以及間接法檢測不同物質(zhì)的存在,并在測試板上設(shè)置對照體系:測試板由包被試紙條,偶聯(lián)墊,樣品墊,吸水墊,覆蓋膜以及測試板外卡組成,它具有靈敏度高,定量準確,不受光學(xué)因素干擾,磁信號穩(wěn)定,不易衰減,試劑簡單,穩(wěn)定,低廉,檢測快速,適合現(xiàn)場檢測等特點.湖北anti-Myc COIP免疫磁珠性能

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