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甘肅anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-27

Anti Flag COIP磁珠

產(chǎn)品價(jià)格


產(chǎn)品貨號(hào)
規(guī)格
價(jià)格
Beenbio -PR002-0.4
0.4 mL
1150 RMB
Beenbio -PR002-1
mL
1780 RMB
Beenbio -PR002-5
5 mL
6825 RMB


產(chǎn)品描述

BEENbio Anti Flag COIP磁珠在大小為1um的納米磁珠上供價(jià)結(jié)合了大量的小鼠Anti Flag單克隆抗體,與傳統(tǒng)的Anti Flag COIP瓊脂糖凝膠比較,抗體結(jié)合能力相同,背景更低,由于采用磁性分離,使得每次COIP可以節(jié)省40%的時(shí)間。


產(chǎn)品特性


項(xiàng)目
特性
抗體亞型
鼠源IgG1
抗體純化方法
Protein A 純化制備
適用范圍
免疫共沉淀(IP),Flag tag蛋白純化
推薦使用體積
COIP: 500μl 細(xì)胞裂解液 使用 10μL磁珠
融合蛋白結(jié)合容量
大于1.1 mg Flag tagged protein/mL 磁珠



儲(chǔ)存條件

4oC長(zhǎng)期穩(wěn)定,


使用說明

磁珠的準(zhǔn)備

重懸Anti Flag 免疫磁珠,取10 μL加入到500 μL TBS,洗滌3次,分離磁珠,棄上清。

樣品的結(jié)合(binding)

在上述沉淀中加入500 μL細(xì)胞裂解液,室溫緩慢孵育2小時(shí)或者4°C條件下過夜,分離磁珠,棄上清。

結(jié)合過程中,磁珠可能會(huì)出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀,屬于正常現(xiàn)象,不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

洗滌(washing):0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次,每次5min,分離磁珠,棄上清。

洗脫(elution):上述所得沉淀中加 50 μL 1×蛋白上樣緩沖液,煮沸5 min,冷卻后分離磁珠,吸取上清液,進(jìn)行SDS-PAGE檢測(cè)。 免疫磁珠法分離膽囊CancerCD133陽性細(xì)胞及其生物學(xué)特性鑒定。甘肅anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

免疫磁珠分離羊水來源OCT-4陽性胎兒干細(xì)胞的可行性.方法 采用免疫磁珠細(xì)胞分選法去除羊水細(xì)胞中CD44和SSEA4陽性細(xì)胞,使OCT-4陽性胎兒干細(xì)胞間接得到分離,體外培養(yǎng)擴(kuò)增后,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)特性,免疫熒光染色計(jì)算OCT-4陽性胎兒干細(xì)胞得率,Real-TimePCR比較分離前后OCT-4表達(dá)量的差異,免疫組化檢測(cè)NANOG,AKP,MAP-2,NGFR和Myosin等細(xì)胞因子的表達(dá).結(jié)果 經(jīng)免疫磁珠分離的細(xì)胞接種12h內(nèi)貼壁生長(zhǎng),形態(tài)呈梭形,部分呈多角形,融合后形成輻射狀排列.免疫熒光染色OCT-4陽性細(xì)胞得率為(90.15±8.25)%,Real-TimePCR檢測(cè)結(jié)果顯示分離后細(xì)胞OCT-4的表達(dá)量較未分離細(xì)胞和MSC有***性差異(P<0.01).原代培養(yǎng)可獲得(1~2)×107個(gè)細(xì)胞,3代可獲得(2~4)×108個(gè)細(xì)胞,傳至10代以后細(xì)胞的增殖能力下降.免疫組化結(jié)果顯示OCT-4陽性胎兒干細(xì)胞表達(dá)NANOG,AKP,MAP-2和NGFR等細(xì)胞因子.結(jié)論 免疫磁珠細(xì)胞分選法可以從羊水中分離出OCT-4陽性的胎兒干細(xì)胞,分離后的細(xì)胞保持干細(xì)胞原有特性及生物學(xué)特征,可作為組織工程種子細(xì)胞.廣東anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠市場(chǎng)報(bào)價(jià)免疫磁珠法富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究進(jìn)展。

實(shí)驗(yàn)優(yōu)化建立基于免疫磁分離技術(shù)對(duì)金黃色葡萄球菌的快速分離方法,為后續(xù)快速檢測(cè)提供基礎(chǔ).利用金黃色葡萄球菌多抗制備的免疫磁珠對(duì)其捕獲.結(jié)合平板菌落計(jì)數(shù),考察包被磁珠時(shí)多抗加入量,免疫磁珠加入量及捕獲時(shí)間等因素對(duì)捕獲效率的影響.在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),并對(duì)該方法的靈敏度,特異性及其在食品中的應(yīng)用效果初步探索.結(jié)果表明,比較好捕獲條件為抗體加入量30μL,免疫磁珠加入量80μL,捕獲時(shí)間45min,在此條件下捕獲效率均超過30%,該方法捕獲限可達(dá)到101CFU/mL,特異性良好,并初步用于羊肉卷洗水中金黃色葡萄球菌的快速分離,捕獲時(shí)間小于1h.免疫磁分離作為一種快速的分離篩選方法,可用于食源性金黃色葡萄球菌的快速分離.

碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)方法在羧基磁珠表面偶聯(lián)抗體,制備可高效分離細(xì)胞的免疫磁珠.方法用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再與抗體上氨基進(jìn)行反應(yīng),從而將抗體偶聯(lián)于磁珠表面,獲得免疫磁珠.使用高性能納米粒度分析儀(HPPS),二辛可酸(BCA)蛋白定量試劑盒,流式細(xì)胞儀,透射電鏡(TEM)表征磁珠的粒徑,磁珠表面聯(lián)接的抗體量及其免疫活性.結(jié)果HPPS檢測(cè)磁珠平均水力學(xué)粒徑為110nm;磁珠表面偶聯(lián)52.4μg抗CD11a+抗體/mg磁珠.經(jīng)磁分離后細(xì)胞的流式分析結(jié)果表明,CD11a+免疫磁珠可以有效分離髓系白血病細(xì)胞系(KG-1a)細(xì)胞,免疫磁珠均勻結(jié)合于細(xì)胞表面,且不影響細(xì)胞的活性.結(jié)論成功制備可用于細(xì)胞分離且不影響分離后細(xì)胞活性的新型免疫磁珠.免疫磁珠法分離和純化胚胎神經(jīng)干細(xì)胞。

COIP實(shí)驗(yàn)步驟
第三步:免疫共沉淀
根據(jù)不同的抗體結(jié)合方式,這里的免疫共沉淀步驟會(huì)稍有不同,但是本質(zhì)是一樣的,都是為了形成抗原-蛋白復(fù)合物。
如果直接使用 Protein A/G 結(jié)合的 beads,先進(jìn)行細(xì)胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育,再加入 beads 將蛋白-抗體復(fù)合物拉下來。
如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定,或者直接將抗體固定在 beads,則將固定抗體的 beads 與細(xì)胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。
增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ,可以降低非特異性結(jié)合,以防止蛋白在陰性對(duì)照樹脂實(shí)驗(yàn)樣品中被檢測(cè)到。
第四步:洗脫與檢測(cè)
***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物洗脫,并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測(cè)鑒定蛋白。當(dāng)?shù)鞍谆蚩贵w對(duì)低 pH 的緩沖液敏感,可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。
注意事項(xiàng):
如后續(xù)需進(jìn)行酶活或功能性分析,則需使用兼容下游檢測(cè)的 Elution buffer 進(jìn)行洗脫。
對(duì)于交聯(lián)劑結(jié)合的 beads,為了保持抗體偶聯(lián)樹脂的活性,應(yīng)立即再生和存儲(chǔ)樹脂,保證抗體可以重復(fù)利用。
免疫磁珠陰性法富集惡性胸腔積液中腫瘤細(xì)胞方法的建立。河南anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商

人骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨間充質(zhì)祖細(xì)胞的免疫磁珠分選和鑒定。甘肅anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

分離轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓造血干細(xì)胞.運(yùn)用針對(duì)小鼠干細(xì)胞表面特異表達(dá)的干細(xì)胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細(xì)胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測(cè)MACS分離后骨髓細(xì)胞中干細(xì)胞(Sca-1陽性細(xì)胞)比例,監(jiān)測(cè)細(xì)胞分選效果.結(jié)果顯示MACS分離后骨髓細(xì)胞中Sca-1陽性細(xì)胞所占比例達(dá)85%以上,涂片觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞組成和細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征與FACS所得結(jié)果一致.MACS可以從轉(zhuǎn)基因小鼠全骨髓細(xì)胞中分離出Sca-1陽性的骨髓造血干細(xì)胞,細(xì)胞純度可達(dá)85%以上.甘肅anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

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標(biāo)簽: 免疫磁珠