免疫組化指的是根據(jù)抗體與抗原特異結(jié)合的原理來(lái)檢測(cè)組織切片中的抗原(如蛋白)。immuno的詞根來(lái)自操作中所使用的抗體,而histo意味著組織。另一種類似的技術(shù)是免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry,簡(jiǎn)稱ICC)。這兩個(gè)詞大家經(jīng)?;熘茫粗孟癫畈欢?,但實(shí)際上還是有點(diǎn)區(qū)別。IHCvsICC對(duì)于IHC,組織是來(lái)自患者或動(dòng)物,經(jīng)過(guò)冷凍或石蠟包埋。將這些組織制成約4μm厚的切片,封片后再處理。通過(guò)這種方法,研究人員可觀察細(xì)胞組分的定位,同時(shí)維持周圍組織的原先結(jié)構(gòu)。對(duì)于ICC,大部分細(xì)胞外基質(zhì)及其他基質(zhì)組分被去除,只剩下整個(gè)細(xì)胞來(lái)染色。ICC的來(lái)源可以是細(xì)胞懸液,來(lái)自患者或動(dòng)物(如血涂片、拭子等),或在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行的組織培養(yǎng)細(xì)胞系。 關(guān)于免疫組化,你想知道的都在這里!寧夏大鼠免疫組化怎么樣
免疫組化應(yīng)該選擇石蠟切片還是冰凍切片?
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是***我向一老師請(qǐng)教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片,可能會(huì)破壞組織的抗原性,如果組織的抗原性較穩(wěn)定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),可能會(huì)使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒(méi)石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時(shí),目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來(lái)做原位雜交的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
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免疫組化染色切片的好壞直接影響著病理醫(yī)生對(duì)其染色結(jié)果的判斷,進(jìn)而影響病理診斷,所以制作一張良好的免疫組化切片至關(guān)重要,它需要病理醫(yī)生與病理技師兩者間的相互協(xié)調(diào),密切配合和共同努力,病理醫(yī)生選擇抗體,設(shè)置對(duì)照,判讀結(jié)果,指導(dǎo)技術(shù);而技術(shù)人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,保證染色質(zhì)量。在免疫組化切片的制作過(guò)程存在多個(gè)環(huán)節(jié),每一環(huán)節(jié)的失誤都可能影響檢測(cè)結(jié)果,如抗原保存,蛋白酶消化,增強(qiáng)技術(shù)及對(duì)抗體的管理、使用和試劑的濃度等等,因此制作一張高質(zhì)量的免疫組織化學(xué)切片是多方面相互配合的結(jié)果。
免疫組化分類中,免疫熒光方法,英瀚斯生物為您進(jìn)行介紹。一開始建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便,所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用比較廣。病理免疫組化多少錢?
關(guān)于免疫組化,抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性,免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來(lái),以此作為抗原或半抗原,通過(guò)免疫動(dòng)物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測(cè)組織或細(xì)胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無(wú)色的,因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來(lái),以其達(dá)到對(duì)組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性,定位或定量的研究。南京英瀚斯生物科技有限公司有設(shè)計(jì)免疫組化的實(shí)驗(yàn)哦!如果您對(duì)此有希望了解更多,可以與我們聯(lián)系!免疫組化可以看什么?山西免疫組化
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免疫組化如何才能充分脫蠟?
(1)蠟不溶于水,如果脫蠟不干凈,少許蠟存留于切片上,將會(huì)引起染色不均勻、陽(yáng)性物時(shí)隱時(shí)現(xiàn)、真假難辨、背景染色增加等。為了解決上述的問(wèn)題,切片在染色前必須徹底脫蠟,目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯,因它脫蠟力強(qiáng),脫蠟時(shí)間較短;
(2)脫蠟的時(shí)間要根據(jù)季節(jié),室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。如果在夏天,室溫較高,脫蠟試劑也新鮮,則脫蠟時(shí)間不需很多,3-5分鐘就已足夠。如果在冬天,室溫較低,脫蠟試劑也較陳舊,則脫蠟時(shí)間需要延長(zhǎng),10-20分鐘或更長(zhǎng)。
(3)當(dāng)天切的切片,燒烤2小時(shí)后進(jìn)行染色,切片帶有溫度進(jìn)行脫蠟這將可加速脫蠟的過(guò)程,如果預(yù)先切好烤好的切片,在染色前,還必須對(duì)切片進(jìn)行加溫10-20分鐘,然后再行脫蠟,這樣脫蠟速度加快,效果魁偉更好??傊?,操作時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的季節(jié),不同的室溫,不同的試劑來(lái)決定,脫蠟的時(shí)間,原則上是要徹底、干凈、完全地脫去切片上的蠟。
切片染色更多問(wèn)題匯總,關(guān)注英瀚斯生物。 寧夏大鼠免疫組化怎么樣