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HE染色觀察細(xì)胞凋亡,凋亡檢測(cè)中形態(tài)學(xué)方法是**直觀、可靠的方法之一。對(duì)組織和各種細(xì)胞進(jìn)行染色后,在光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡下觀察,通過觀察細(xì)胞的形態(tài)或染色的類型來(lái)判斷凋亡的發(fā)生與否。細(xì)胞涂片或細(xì)胞甩片的制備:對(duì)于貼壁細(xì)胞,可將蓋玻片放于培養(yǎng)器皿中,讓培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)于玻片上,然后用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后取出,用4%多聚甲醛固定5min。對(duì)于懸浮細(xì)胞,用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后,離心1000r/min收集細(xì)胞,用PBS洗2次,收集調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1X105/ml,涂片或用離心甩片,用4%多聚甲醛固定5min;在光學(xué)顯微鏡下,貼壁細(xì)胞由原來(lái)的梭形或多角形變小、變圓,核呈藍(lán)色或藍(lán)黑色,胞漿呈淡紅色,核固縮、破碎,形成凋亡小體等。懸浮細(xì)胞,整個(gè)細(xì)胞皺縮,核固縮,破碎,形成凋亡小體,染色質(zhì)顏色加深等。HE染色 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。湖北病理HE染色檢測(cè)
HE染色不管怎么操作,始終無(wú)法染色或淡染答:這種情況一般因?yàn)榻M織固定時(shí)采用了酸性甲醛;或者組織在甲醛中浸泡時(shí)間太長(zhǎng);或者久置的甲醛變性分解為甲酸。補(bǔ)救:防患于未然,要么使用新鮮的中性甲醛固定,要么在存放的甲醛中加一點(diǎn)碳酸鈉中和甲酸。對(duì)于已經(jīng)固定的組織可考慮再次固定;對(duì)于已經(jīng)制出的片子,染色前采用5%重鉻酸鉀溶液浸泡半小時(shí)以上,然后自來(lái)水漂洗5min,可改善染色。也可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中,補(bǔ)充染色媒介,增強(qiáng)蘇木素與組織的親和力(蘇木素染色必須要媒介才能染上,單純的蘇木素與組織的親和力很弱)。江蘇結(jié)果客觀的HE染色報(bào)告冰凍切片是否可以做HE染色?
HE染色標(biāo)本一般是針對(duì)石蠟標(biāo)本,脂滴和石蠟都是的有機(jī)物, 都具有非極,脂滴應(yīng)該可以溶解石蠟的。 HE染色就是用蘇木精和伊紅對(duì)細(xì)胞內(nèi)的核糖體和細(xì)胞質(zhì)染色的方法。 H:Hematoxylin,蘇木精 E:Eosin,伊紅 蘇木精(Hematoxylin,H)是一種堿染料,可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫色,被堿染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿。 伊紅(,E)是一種酸染料,能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,被酸染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸。染色前,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,***入蒸餾水,就可染色。南京英瀚斯生物
HE染色細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。著***況與組織或細(xì)胞的種類有關(guān),也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí),伊紅著色由淺變深。HE染色是病理實(shí)驗(yàn)中比較用的一種基礎(chǔ)染色方法。
HE染色細(xì)胞質(zhì)過染分析及應(yīng)對(duì)原因:(1)伊紅染色液濃度太高,特別是焰紅燃料、四溴四氯熒光素鈉的存在;(2)切片在伊紅染色時(shí)間過長(zhǎng);(3)切片在伊紅染色后經(jīng)乙醇脫水步驟時(shí)過的太快,而使乙醇分化伊紅的作用不能產(chǎn)生。對(duì)策:適當(dāng)稀釋伊紅染色液,減少伊紅染色時(shí)間,或者使切片在乙醇脫水等步驟時(shí),停留時(shí)間相對(duì)均勻。同樣,也要檢查切片的厚度是否合適。切片中出現(xiàn)藍(lán)黑色沉淀物分析及應(yīng)對(duì)原因:蘇木精染色液中的金屬膜,黏附在玻片上。對(duì)策:每天染色前仔細(xì)過濾蘇木精染色液,或建議使用半氧化蘇木精染色液,如Gill蘇木精染色液,可以避免過多的金屬膜產(chǎn)生。腦組織HE染色如何觀察?廣西性價(jià)比高的HE染色哪家好
HE染色切片知識(shí)以及如何做出漂亮的切片。湖北病理HE染色檢測(cè)
HE染色石蠟和冰凍切片樣本的處理,樣品處理:a.對(duì)于石蠟切片:二甲苯中脫蠟5-10分鐘;換用新鮮的二甲苯,再脫蠟5-10分鐘;無(wú)水乙醇5分鐘;90%乙醇2分;70%乙醇2分鐘;蒸餾水2分鐘.b.對(duì)于冰凍切片:蒸餾水2分鐘。c對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞:用4%多聚甲醛固定10分鐘以上。蒸餾水洗滌2分鐘。換用新鮮的蒸餾水,再洗滌2分鐘。蘇木素伊紅(HE)染色對(duì)于上述處理好的樣品:蘇木素染色液染色5-10分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時(shí)間)。浸自來(lái)水中沖洗去多余的染色液,約10分鐘。蒸餾水再洗滌一遍(數(shù)秒鐘)。95%乙醇5秒。伊紅染色液染色30秒-2分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時(shí)間)。此時(shí),如果需要直接觀察,可以用70%乙醇洗滌2次。如需脫水、透明后封片按后續(xù)步驟進(jìn)行,70%乙醇洗滌后仍可按照后續(xù)步驟進(jìn)行脫水、透明和封片處理。湖北病理HE染色檢測(cè)