免疫組化的抗原修復(fù)

很多抗原的可視性可以通過(guò)抗原修復(fù)來(lái)提高，抗原修復(fù)可以打破福爾馬林固定時(shí)形成的蛋白質(zhì)交聯(lián)，從而使被掩藏的抗原顯現(xiàn)出來(lái)?？乖迯?fù)技術(shù)包括不同時(shí)間長(zhǎng)度的加熱或者利用蛋白酶來(lái)做酶消化，例如蛋白酶K，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加熱的方法通常會(huì)用到微波爐，高壓鍋，蒸箱或水浴。將樣品在接近100°C高溫加熱20分鐘后再冷卻同等的時(shí)間。**常用的抗原修復(fù)液有a)檸檬酸鹽緩沖劑,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用檸檬酸鹽緩沖劑做抗原修復(fù)：檸檬酸鹽緩沖劑配方:10mM檸檬酸鈉,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM檸檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0將含有檸檬酸鈉或檸檬酸鹽緩沖劑的染色盤(pán)放到蒸箱或者水浴中，預(yù)熱到95-100°C。將切片浸沒(méi)于染色盤(pán)中。蓋子虛掩，孵育20-40分鐘(研究者需自己決定比較好的孵育時(shí)間)。關(guān)掉蒸箱或水浴，將染色盤(pán)置于室溫下，讓切片冷卻20分鐘。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分鐘。開(kāi)始封閉步驟。 英瀚斯生物，專(zhuān)業(yè)承接免疫組化等各類(lèi)病理染色檢測(cè)！甘肅大鼠免疫組化要多久

免疫組化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)總結(jié)：

?本實(shí)驗(yàn)室所用切片一般是石蠟切片。

?烘片：使蠟片水分蒸發(fā)，石蠟軟化，組織切片牢固貼在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差異。

?抗原修復(fù)時(shí)，使片子始終浸沒(méi)在修復(fù)液中，液體不能干。

?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱，濕盒放置1h，省時(shí)間和結(jié)合效果好，不要超過(guò)1h，容易過(guò)染。

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?二抗使用：兩個(gè)二抗放大信號(hào)或一個(gè)二抗；若抗體信號(hào)強(qiáng)，可不用放大信號(hào)，盡量增大信噪比。

?10XDAB在常溫溶解，盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配，放于4度儲(chǔ)存時(shí)間久了效果不佳。

?復(fù)水和脫水時(shí)所用的梯度酒精不可混用，要區(qū)分開(kāi)。

?加抗體和顯色液時(shí)，都要將片子甩干，在半干半濕的狀態(tài)下再加，不然容易造成溶液的二次稀釋。

?整個(gè)操作過(guò)程中在顯色之前，一定不能干片。 寧夏免疫組化檢測(cè)免疫組化結(jié)果分析是什么？

免疫組化結(jié)果背景染色較深的原因有哪些？

 （1）抗體濃度過(guò)高：一抗?jié)舛冗^(guò)高是常見(jiàn)的原因之一。解決辦法是，每次使用新抗體前應(yīng)當(dāng)對(duì)其工作濃度進(jìn)行測(cè)試，使每一抗體個(gè)體化，找到適合自己實(shí)驗(yàn)室的理想工作濃度，既使是即用型的抗體也應(yīng)如此，不能只簡(jiǎn)單的按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色。

（2）抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或溫度較高：解決辦法是，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，比較好隨身佩帶報(bào)時(shí)表或報(bào)時(shí)鐘，及時(shí)提醒，避免因遺忘而造成時(shí)間延長(zhǎng)?，F(xiàn)在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的時(shí)間不是傳統(tǒng)的1小時(shí)，而是30分鐘，因此，要根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行調(diào)整。 

（3）DAB變質(zhì)和顯色時(shí)間太長(zhǎng)：DAB比較好現(xiàn)用現(xiàn)配，如有沉渣應(yīng)進(jìn)行過(guò)濾后再用。配制好的DAB不應(yīng)存放時(shí)間太長(zhǎng)，因?yàn)樵跊](méi)有酶的情況下，過(guò)氧化氫也會(huì)游離出氧原子與DAB產(chǎn)生反應(yīng)而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節(jié)約的辦法是不可取的。DAB的顯色比較好在顯微鏡下監(jiān)控，達(dá)到理想的染色程度時(shí)立即終止反應(yīng)。但是當(dāng)染**太多時(shí)或用染色機(jī)時(shí)，這樣做似乎不現(xiàn)實(shí)，但至少應(yīng)對(duì)一些新的或少用的抗體顯色時(shí)進(jìn)行監(jiān)控，避免顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

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免疫組化的發(fā)展路程？在臨床病理診斷中，免疫組織化學(xué)(IHC)是一種很重要的技術(shù)和手段，從20世紀(jì)70年代開(kāi)始，免疫組化技術(shù)就應(yīng)用于病理診斷，對(duì)于診斷cancer、cancer分類(lèi)、判斷預(yù)后產(chǎn)生了巨大的影響，同時(shí)也擴(kuò)展了人們對(duì)于各種疾病及cancer形成過(guò)程的認(rèn)識(shí)，提高了病理診斷與研究水平。但是，隨著免疫組化的廣泛應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)免疫組化技術(shù)存在一些局限性。深入研究免疫組化原理和技術(shù)，必須熟悉各種抗體真陽(yáng)性反應(yīng)部位，實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化，使免疫組化在病理診斷中發(fā)揮比較大的輔助作用。如果您有免疫組化相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。英瀚斯生物，專(zhuān)業(yè)病理染色切片平臺(tái)，免疫組化效果好！

免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些？

1、抗體濃度和質(zhì)量問(wèn)題以及抗體來(lái)源選擇錯(cuò)誤。不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng)，必須摸索比較好濃度。

2、抗原修復(fù)不全，對(duì)于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來(lái)打開(kāi)抗原表位，以利于與抗體結(jié)合；建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試。有人做過(guò)實(shí)驗(yàn)，這是比較好的時(shí)間和次數(shù)。若不行，還可高壓修復(fù)。

3、組織切片本身這種抗原含量低。

4、血清封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

5、DAB孵育時(shí)間過(guò)短。

6、細(xì)胞通透不全，抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。

7、開(kāi)始做免疫組化，建議一定要首先做個(gè)陽(yáng)性對(duì)照片，排除抗體等問(wèn)題。 免疫組化失敗的原因？山西小鼠免疫組化要多久

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免疫組化臨床應(yīng)用對(duì)“未分化”cancer的分類(lèi)。未分化cancer包括cancer或肉瘤，在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer細(xì)胞的起源特征不能分類(lèi)，初步區(qū)分組織學(xué)類(lèi)型用非特異性抗體，在其基礎(chǔ)上再選用特異性抗體做進(jìn)一步鑒定。如分化差的cancer可顯示Vimentin或S-100蛋白，有時(shí)淋巴瘤可以表達(dá)上皮膜抗原，一些黑色素瘤表現(xiàn)出角蛋白，這同時(shí)也強(qiáng)調(diào)了在cancer診斷中應(yīng)使用一組抗體而不是單個(gè)抗體。如果您有實(shí)驗(yàn)外包的需求，可以與我們南京英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系，我們也有做免疫組化的服務(wù)！甘肅大鼠免疫組化要多久

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