ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了普遍的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。下面分析ELISA試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法。選擇試劑，選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣，可能原因：血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；ELISA屬固相，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。ELISA試劑盒供應(yīng)公司

ELISA試劑盒如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 標(biāo)本較多時(shí)，請分批操作。可能原因：孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法： 貼封片或加蓋；按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。洗板ELISA試劑盒可能原因：采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。ELISA試劑盒供應(yīng)公司ELSIA 就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。

ELISA試劑盒要求陽性參閱血清和陰性參閱血清的O.D值有明顯差別。運(yùn)用ELISA檢測試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)別離以陽性對照與陰性對照操控實(shí)驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)效果的準(zhǔn)確性。ELISA試劑盒有時(shí)本底較高，說明有非特異性反應(yīng)。在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其間包含：固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。

ELISA試劑盒操作要點(diǎn)一共有七大點(diǎn)，它們分別是：標(biāo)本的采取和保存、試劑的準(zhǔn)備、加樣、保溫、洗滌、顯色和比色、酶標(biāo)比色儀、結(jié)果判斷。作ELISA試劑盒測定的標(biāo)本十分廣闊，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA試劑盒檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA試劑盒中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA試劑盒測定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。ELISA試劑盒加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。

ELISA試劑盒試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到全世界科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。ELISA生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已主要應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。酶標(biāo)抗體，它是ELISA中關(guān)鍵試劑之一，既要求有酶催化活性，又能保持了抗體的免疫活性。ELISA檢測試劑盒酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。海南ELISA試劑盒哪家靠譜

ELISA試劑盒中用的蒸餾 水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。ELISA試劑盒供應(yīng)公司

ELISA試劑盒的反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。解決辦法：保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水特殊材料）上輕輕拍干； 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械?？赡茉蛉缂咏K止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。ELISA試劑盒供應(yīng)公司

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